论文部分内容阅读
本论文研究的主要内容是探讨在胚胎培养液中添加不同浓度的维生素C(vit c)和维生素E(vit e)及二者联合使用对水牛体外受精早期胚胎发育和凋亡的影响,以及比较在成熟液中添加发情水牛血清(EBS)或发情黄牛血清(ECS)对水牛卵母细胞体外成熟早期胚胎发育的效果,为改善水牛体外受精早期胚胎培养液组分及培养系统提供科学依据。论文共分三章,第一章为文献综述、第二章和第三章为试验研究部分。第二章研究目的是探讨在胚胎培养液中添加不同浓度的维生素C和维生素E及二者联合使用对水牛体外受精早期胚胎发育和凋亡的影响。方法:抽取来自屠宰场水牛卵巢表面直径为2～6mm卵泡的卵母细胞,在体外成熟培养后与水牛精子进行体外受精(IVF),受精后18～20 h将假定受精的卵子移入添加有不同浓度的vit c和vit e培养系统进行培养,受精后2d检查分裂率,6～9 d检查囊胚发育率;用细胞凋亡试剂盒(KGA1032)试剂进行染色,统计囊胚总细胞数、囊胚细胞凋亡率和坏死率。结果发现:1)在胚胎培养液中添加浓度为100μmol/L vit c或200μmol/L vit c,水牛IVF早期胚胎的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数都有一定的提高,而D7囊胚率和孵化囊胚率比对照组的低,但差异不显著(P＞0.05)。添加高浓度的vitc(200μmol/L)对降低囊胚细胞凋亡率、坏死率和水牛IVF早期胚胎的发育有一定的促进作用,但不显著;2)在胚胎培养液中添加不同浓度(20μmol/L、100μmol/L或200μmol/L)的vit e,随着vit e浓度的增加,水牛体外受精早期胚胎的卵裂率、囊胚率均有一定的提高,但差异不显著(P＞0.05)。添加100μmol/L vit e,受精后D7形成的囊胚的比率以及孵化囊胚率高于对照组,但差异不显著(P＞0.05)。对于胚胎凋亡的影响,添加vit e各处理组,其囊胚细胞凋亡率、坏死率都有不同程度的降低,但差异均不显著(P＞0.05);3)联合添加等剂量的各种浓度(20μmol/L、100μmol/L和200μmol/L)的vit c和vit e,水牛早期胚胎囊胚率和囊胚率,在各处理组与对照组之间没有多大的变化;联合添加等剂量低浓度(20μmol/L)或高浓度(200μmol/L)的vit c和vit e,对水牛体外受精早期胚胎质量的提高有一定的促进作用,同时细胞凋亡率和坏死率也有一定程度的下降,但差异不显著(P＞0.05);4)用细胞凋亡检测试剂盒KGA1032对水牛囊胚进行染色,能够区分发生凋亡和坏死的细胞。结果表明:1)在TCM-199培养液中添加200μmol/L vit c,对水牛体外受精早期胚胎发育和降低囊胚细胞凋亡率、坏死率有一定促进作用;2)在TCM-199培养液中添加vit e,有助于促进水牛体外受精早期胚胎发育和降低囊胚细胞凋亡率。添加vit e的浓度以100μmol/L效果最好;3)在TCM-199培养液中联合添加等剂量的vit c和vit e,对水牛体外受精早期胚胎发育率没有明显的促进作用,但对降低胚胎细胞凋亡率、坏死率有促进作用。第三章研究目的是比较在成熟液中添加发情水牛血清(EBS)或发情黄牛血清(ECS)对促进水牛卵母细胞体外成熟早期胚胎发育的效果。在成熟培养液中分别添加10%体积浓度的EBS和10%体积浓度的ECS对水牛卵母细胞进行体外成熟,经体外受精和体外培养后发现,在TCM-199成熟液中添加10%EBS,获得了与ECS相似的囊胚率,20.59%VS 21.09%,且D7囊胚率和孵化囊胚率(占囊胚总数的百分比)要高于用ECS成熟的(P＜0.05),但D8囊胚细胞数显著低于用ECS成熟的(P＜0.05)。结果证明,发情水牛血清(EBS)能够应用于水牛卵母细胞的体外成熟体系中。