肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）最早于肝切除后的残余肝组织中被发现，在90年代初期从大鼠血小板中分离提纯，其活性不具种属特异性，因最初被发现可刺激肝细胞合成DNA而得名。肝细胞生长因子是很强的促肝细胞增殖因子，不仅能刺激肝细胞的再生，促进肝功能恢复，而且可改善肝纤维化，在损伤因子刺激时保护肝细胞。研究证实，HGF是迄今为止发现的最强大的刺激肝细胞分裂增殖的物质。因此有关肝细胞生长因子的研究是近年治疗肝脏疾病的研究热点。 研究表明HGF不仅对原代培养的肝细胞是强促有丝分裂原。而且在动物体内实验中，HGF同样在肝脏再生的过程中发挥着高效的促有丝分裂作用。在肝切除术后，血浆HGF快速升高，肝脏贮脂细胞表达HGFmRNA水平增加，同时其它组织的间质细胞如肺、脾的HGFmRNA表达水平也增加，从而促使肝细胞DNA的合成增加。在肝切除术后，HGF不仅可增强肝脏的再生而且在术后24h内可快速改善高胆红素血症，减轻门脉周围炎症和胆小管阻塞。此外，HGF还有肝细胞保护作用，不仅对体外培养的受四氯化碳等肝毒素损伤的肝细胞有保护作用，而且对实验性的肝功能损伤动物模型也有明显的治疗作用。但HGF主要由肝脏间质细胞产生，肝细胞 第四军医大学博土论文6 一 仅能产生HGF的受体C－met。为研究自分泌内源性HGF对肝细胞生长增殖 及抗损伤能力的影响，我们设计了此实验。 急性肝功能衰竭hCll比liVCr历uW，＊LF ）是一种涉及多器官的临床综 合征，由大面积的肝细胞坏死引起，以很快发展的肝性脑病和严重的肝功 能损害为特点。肝功能衰竭的治疗目前仍是世界上一大医学难题，同时肝 功能衰竭也是危害人类健康的重要原因之一。我国是病毒性肝炎高发区， 每年有数百万的人死于肝功能衰竭。在肝胆外科，肝功能衰竭尤其是急性 肝功能衰竭也并不少见。这通常是肝切除术后常见而严重的并发症，也是 导致术后死亡的主要原因。肝切除术后往往引起肝功能的损害，尤其是广 泛肝切除术后，即使手术经过比较顺利，术后也常有轻微的黄疽、血浆蛋 白质降低、血清转氨酶升高等变化。对某些肝切除的患者，特别是合并明 显肝硬化者，则可能发生肝功能不全或衰竭。 本文旨在探讨HGF基因的自分泌表达对肝细胞生长增殖及抗损伤能力 的影响，以及对急性肝功能衰竭动物模型的作用，为急性肝功能衰竭或其 它肝脏疾病的基因治疗提供实验材料和理论依据。本实验进行了以下几个 方面的研究并获得了相应的实验结果： 1．应用基因克隆重组技术，构建了含人肝细胞主长因子基因和绿色荧光蛋 白基因的真核表达载体 pEGFp－HGF，经酶切鉴定证明载体构建正确。 2 采用脂质体介导的基因转染方法，将含人 HGF CDNA的真核表达载体 pEGFPHGF转入人肝细胞系 QZG细胞中，经原位杂交、免疫组化、 荧光显微镜观察证实HGF己获得表达。 3．将稳定转染了 HGF基因的细胞与未转染的细胞的生物学行为进行了比 较观察：从0＊A、RN A、蛋白质等各水平的检测结果均表明，＊＊F对 培养的正常人肝细胞（QZG细胞）的生长增殖有明显的促进作用。而 且转染HGF基因对四氯化碳损伤的肝细胞有明显的保护作用，不仅可 提高染毒细胞的存活率，还可降低受损细胞ALT、K”漏出。 第四军医大学博士论文7 4．建立了急性肝功能衰竭动物模型，在活体进行基因转染，结果证实，活 体内转染HGF基因，对急性肝功能衰竭有一定的治疗作用，体观在提 高了存活率，肝功能状况有一定的缓解，病理组织学观察也证实，大鼠 肝脏组织学改变明显减轻。 综上所述，本实验证实HGF基因对QZG细胞的生长增殖有明显的促 进作用，而且增强了 QZG细胞的抗损伤能力。进一步应用 HGF基因转染 在急性肝功能衰竭动物模型中进行应用，有一定的治疗作用。