Cu2O/SBA-3模拟蛋白酶及其对人卵巢癌细胞的作用研究

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由于天然蛋白酶具有成本高、稳定性差、相对活性低以及对反应条件苛刻等缺点,使得人工模拟酶成为研究的热点。由于水解肽键极其困难,并且蛋白酶具有重要的生物学和工业应用,因此可用于水解蛋白质中肽键的有效酶模拟物的合成在技术上仍然具有挑战性。此外,每年因癌症而死亡的人数正在增加。特别是,卵巢癌在全世界妇科恶性肿瘤中具有最高的死亡率和第二高的发病率。当前,对于癌症患者来说,使用更有效,更新的抗癌药物进行治疗和进行癌症的早期诊断是提高癌症患者存活率的关键之处。然而,当前的抗癌试剂具有功效差和选择性差的缺点,因此,具有高抗癌活性的药物的研究和开发是当前医学领域研究的热点。据报道,含Cu的复合物,例如本课题组率先提出的Cu-MOF、CQDs/Cu2O、CuFe2O4等材料既具有模拟蛋白酶的活性又能抑制卵巢癌细胞的生长,但是却未见Cu2O和介孔材料SBA-3的复合物(Cu2O/SBA-3)在模拟蛋白酶和抗癌方面的研究。基于此,本论文中,我们首次描述了Cu2O和SBA-3的复合物(Cu2O/SBA-3)表现出优异的模拟蛋白酶活性和对人卵巢癌细胞的抗癌活性,主要内容包括:(1)Cu2O/SBA-3材料用于催化水解牛血清白蛋白(BSA)。探究了pH、温度和反应时间对Cu2O/SBA-3催化活性的影响。实验结果表明Cu2O/SBA-3具有类似于胰蛋白酶的内在酶模拟活性。稳态动力学研究表明,Cu2O/SBA-3的Km值甚至低于游离胰蛋白酶和其他已报道的蛋白酶模拟物的Km值,表明BSA对Cu2O/SBA-3表面的亲和力更高。当温度升至70℃时,Cu2O/SBA-3的催化水解活性明显增强。此外,Cu2O/SBA-3还具有理想的稳定性和良好的可重复使用性。(2)基于Cu2O/SBA-3在pH=7下的水解效果最好,进一步将Cu2O/SBA-3材料用于pH=7条件下催化水解酪蛋白(Casein)。研究了反应温度和反应时间以及催化剂浓度对Cu2O/SBA-3催化活性的影响。结果表明,Cu2O/SBA-3即使在低温37℃的条件下仍能水解酪蛋白,具有较高的水解活性。(3)对Cu2O/SBA-3材料抗癌活性评价,使用MTT法探究Cu2O/SBA-3对人结肠直癌细胞HT-29、人卵巢癌细胞SKOV3、人宫颈癌细胞Hela、人非小细胞肺癌A549和正常小鼠成纤维细胞BABL-3T3的细胞毒性,实验结果表明,Cu2O/SBA-3可以有效区分癌细胞和正常细胞,并选择性的抑制癌细胞的增殖。在这些癌细胞的抑制作用中,对人卵巢癌细胞SKOV3的抑制作用最强(IC50=0.65μg mL-1)。与抗癌药物奥沙利铂(OXA)(IC50=64.60μg mL-1)和青蒿琥酯(ART)(IC50=96.90μg mL-1)相比,Cu2O/SBA-3对细胞的IC50值均低于这两种药物,说明其抑制细胞增殖的作用高于这两种药物。通过AO/EB、Hoechst33342和细胞流式分析表明,Cu2O/SBA-3通过将SKOV3细胞阻滞于S期而诱导细胞的凋亡,主要发生早期和晚期凋亡。通过体外划痕实验表明,Cu2O/SBA-3可以抑制SKOV3的迁移。
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