肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,MP）是儿童社区获得性肺炎的主要病原体之一,而黏附是MP繁殖和致病的先决条件。支原体的致病机制是一个相当复杂的过程,既可以通过黏附素和侵袭性酶等起到直接损伤的作用,也可以通过代谢产物等起到间接伤害效果。肺炎支原体的致病机制,一般包括对呼吸道上皮细胞的黏附、激活宿主免疫系统以及直接入侵宿主细胞等。本实验提出研究假设:MP通过P1蛋白黏附到宿主呼吸道上皮细胞表面,直接活化细胞信号转导通路从而引起免疫反应。本实验拟利用GSTpull-down及质谱分析的方法明确宿主细胞表面与P1蛋白直接相互作用的蛋白,通过黏附实验从转录组学的角度揭示P1蛋白直接作用下宿主细胞内差异表达的基因,并分析炎症通路相关因子,从而明确黏附直接相关信号通路,为进一步深入发现MP新的发病机理提供了基础,,并为MP肺炎的治疗和诊断提供潜在靶点。P1蛋白正确定位在MP顶端,是其吸附于呼吸道上皮细胞的必要前提,是参与粘附的最主要组分。炎症因子TNF-α、IL-1β以及IL-4、IL-8的释放与MP的黏附作用相关,但黏附与炎症反应间的作用机制尚不明确。前期研究发现P1重组蛋白可以直接黏附Hela细胞,可刺激机体产生特异性免疫应答。本实验纯化的蛋白经过质谱检测后发现与GST作用的蛋白有12种,与P1-GST蛋白相互作用的蛋白有68种。P1-GST组与GST组比较,差异蛋白中位于细胞膜上的蛋白有22种,其中差异较为明显的与P1直接或间接相互作用蛋白为为驱化因子CCR5和膜联蛋白A2（annexin A2,ANXA2）两种蛋白,这两种蛋白均具有催化活性,金属离子结合,蛋白质结合,受体活性及信号传感器活性等多种功能。以往研究发现CCR5是HIV-1感染的辅助受体,而ANXA2参与多种病原菌与宿主的相互作用。本研究中转录组测序数据中GO功能基因富集显示,抗感染相关基因ELANE、ROMO1、RARRES2、RPS19和GSDMD下调。通过转录组测序数据的KEGG信号通路富集分析发现,HRAS基因与多种炎症信号通路相关。本实验最后得出结论:1)北京地区2019年肺炎支原体的阳性检出率为36.5%（678/1856）,其中主要是基因型是P1-1型（75.1%）,正在发生P1基因型由P1-1型到P1-2型的型别转换。2)成功构建了带有GST标签的P1蛋白原核表达载体,并表达纯化到P1-GST重组蛋白。3)GST pull-down联合质谱分析,成功发现了A549细胞中多个可能与P1蛋白有体外相互作用的蛋白。4)通过转录组测序分析,发现P1蛋白在肺炎支原体感染中与多种炎症信号通路密切相关。