【摘 要】
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目的:最新研究表明,IL-7通过激活JAK/STAT信号通路抑制急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）的细胞凋亡,从而促进T-ALL的发生和发展。本课题组前期研究表明白藜芦醇具有体内外抗T-ALL的作用,但是否通过IL-7介导的JAK/STAT信号通路发挥作用尚未见报道,本研究拟应用白藜芦醇作用于T-ALL Molt4细胞株和小鼠模型,观察IL-7及JAK/STAT通路中信号分子的变化,进一步探究白藜
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目的:最新研究表明,IL-7通过激活JAK/STAT信号通路抑制急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）的细胞凋亡,从而促进T-ALL的发生和发展。本课题组前期研究表明白藜芦醇具有体内外抗T-ALL的作用,但是否通过IL-7介导的JAK/STAT信号通路发挥作用尚未见报道,本研究拟应用白藜芦醇作用于T-ALL Molt4细胞株和小鼠模型,观察IL-7及JAK/STAT通路中信号分子的变化,进一步探究白藜芦醇抗T-ALL的作用机制。方法:1.将T-ALL细胞株Molt4分成三组:对照组（Control组）;二甲基亚砜处理组（DMSO组）;白藜芦醇处理组（Res组）。其中Control组不做任何处理;DMSO组用0.05%DMSO处理48 h;Res组用200μmol/L白藜芦醇处理48 h。将15只6-8周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分成三组:正常对照组（Control组）、T-ALL模型组（T-ALL组）、白藜芦醇处理组（Res组）。其中Control组以0.05%DMSO灌胃处理;T-ALL组以0.05%DMSO灌胃处理;Res组以10 mg/m L白藜芦醇灌胃处理。2.T-ALL小鼠模型的建立:各组小鼠连续灌胃6周后,对T-ALL组和Res组小鼠通过尾静脉注射ICN1-GFP+T-ALL细胞,Control组小鼠则尾静脉注射等体积的RPMI-1640培养基。于尾静脉注射的第7、14、21天,对各组小鼠外周血中白血病细胞进行流式细胞术检测并计算百分比,以小鼠外周血中ICN1-GFP+T-ALL细胞比例大于10%为造模成功。3.应用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测各组细胞增殖能力;应用蛋白免疫印迹法（Western Blot法）检测各组细胞和小鼠脾脏组织JAK1、JAK3、STAT5、磷酸化JAK1（p-JAK1）、磷酸化JAK3（p-JAK3）、磷酸化STAT5（p-STAT5）的蛋白表达水平。4.应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞和小鼠血清中IL-7、IL-7R含量;应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组小鼠脾脏组织中IL-7、IL-7R mRNA及JAK/STAT通路靶基因Pim1的表达水平。结果:1.一般情况:（1）各组细胞株一般情况:与Control组细胞相比,Res组细胞密度明显降低,出现细胞膜皱缩、破损及细胞内容物溢出等细胞凋亡的特征。（2）各组小鼠一般情况:与Control组相比,T-ALL组小鼠精神状态差,小鼠腹部由于脾脏显著增大而呈现明显膨隆,Res组小鼠较T-ALL组精神状态明显改善,腹部呈现轻度膨隆,脾脏显著减小。2.CCK-8检测细胞增殖能力结果:与Control组细胞相比,Res组细胞增殖能力在Res处理48h、72h后明显降低（P＜0.05）。3.流式细胞术检测白血病细胞:在造模第14和21天,T-ALL组小鼠外周血中ICN1-GFP+T-ALL细胞比例明显升高,而经Res处理后明显减少（P＜0.01）。4.应用Western Blot法检测JAK/STAT信号通路中蛋白表达水平:（1）各组Molt4细胞的蛋白表达水平:与Control组细胞相比,Res组细胞p-JAK1/JAK1、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5相对蛋白表达水平显著下降（P＜0.01）。（2）各组小鼠的蛋白表达水平:与Control组小鼠相比,T-ALL组小鼠脾脏中p-JAK1/JAK1、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5相对蛋白表达水平均显著上调（P＜0.01）,经Res处理后,各蛋白相对表达水平明显降低（P＜0.01）。5.ELISA检测各组IL-7、IL-7R水平:与Control组Molt4细胞相比,Res组细胞中IL-7、IL-7R含量均显著下降（P＜0.01）;与Control组小鼠相比,T-ALL组小鼠血清中IL-7、IL-7R含量明显上升（P＜0.01）,经Res处理后明显降低（P＜0.01）。6.RT-qPCR检测各组Pim1、IL-7、IL-7R mRNA表达水平:与Control组细胞相比,Res组细胞Pim1、IL-7、IL-7R mRNA表达均显著下降（P＜0.01）;与Control组小鼠相比,T-ALL组小鼠脾脏中IL-7、IL-7R mRNA及靶基因Pim1表达明显升高（P＜0.01）,经Res处理后各基因表达水平明显下降（P＜0.01）。结论:T-ALL细胞株和小鼠模型IL-7和IL-7R表达水平升高,JAK/STAT信号通路被激活;白藜芦醇作用于T-ALL细胞株和小鼠模型后,可能通过下调IL-7和IL-7R的表达水平,抑制其介导的JAK/STAT信号通路,进而降低靶基因Pim1转录发挥抗T-ALL的作用。
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