粘细菌的分离纯化及分类研究

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本实验以越南及我国云南、河北、青海等地的土壤作为研究材料,利用兔、羊粪球等诱导出多种粘细菌的子实体,除利用经典的粘细菌分离纯化方法外,还根据粘细菌的生物学特性进行了分离纯化方法上的创新和改良。使得一些常规方法难于纯化的菌株的纯化变得简单易行,加快了纯化的进程;CAS验纯法使得粘细菌的纯化和验纯两大步骤得以同时进行,大大缩短了粘细菌的纯化周期。对各种分离纯化方法进行优化组合得到最适用的分离纯化方案,克服了长期以来一直制约粘细菌研究的一个瓶颈,为此类微生物资源的开发利用奠定了基础。 从云南、河北、青海等地的42个土壤样品中分离得到了10个属(Archangium、Myxococcus、Cystobacter、Corallococcus、Melittangium、Sorangiztm、Polyangium、Chondromyces、Angiococcus、Stigmatella)的150余株粘细菌,其中包括一些尚未有描述的菌株有待鉴定。对这些特有自然生态环境的粘细菌按不同地点、植被、营养基质进行统计比较,结果表明粘细菌生态分布极为广泛,具有丰富的生态多样性。 根据分离出菌株的子实体形态、菌落形态和细胞营养体、粘孢子形态,将其初步鉴定到属或种。挑选了4株形态较具代表性的菌株进行16S rDNA序列测定,以初步确定其归属,这4株菌编号分别为BD86、YN78、BD54、SHX9。对它们进行了16S rDNA基因全序列测定,将之与GenBank中所有已测定的原核生物的16S rDNA序列进行比较,构建了孢囊杆菌亚目的系统发育进化树,确定了它们的系统发育地位。并进行了生理生化试验及G+Cmol%的测定。结果表明:BD86、YN78均属于粘球菌属(Myxococcus),前者与Myxococcus xanthus关系最近,后者与Myxococcus stipitatus关系最近。BD54、SHX9属于孢囊杆菌属(Cystobacter),与Cystobacter ferrugineus的关系最近。从树状图很容易看出仅仅通过形态学指标对粘细菌进行分类已经不能满足需要,许多外界因素都会导致错误分类。实验结果显示四株供试菌株的生理生化特征与16S rDNA序列比较结果基本一致,更加肯定了分子分类和生理生化特征在粘细菌分类中的重要作用。 摘要竺竺竺竺竺竺竺竺竺竺竺竺竺竺竺竺 用立体解剖镜详细观察了6株菌的生物学特性—子实体形态发生的过程,并将图象输入计算机,记录了它们在兔粪基质上发育的全部过程。此外对BD86、YN78作了小室培养和一甘油诱导实验,观察了细胞聚集和粘饱子形成的过程。该研究为粘细菌在生物进化、系统发育及代谢产物等方面的研究奠定了坚实的基础。
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