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目的:采用siRNA干扰人NOB1基因后对卵巢癌SKOV3细胞在体外的生长繁殖、细胞周期以及凋亡的作用,深入的探讨NOB1基因在卵巢癌的发生发展中所起的作用,同时为研究人NOB1基因作为肿瘤治疗靶点的分子机制提供新的线索和参考依据。方法:1、将人卵巢癌SKOV3细胞培养至对数期,传代并接种于6孔板中继续培养。2、采用Santa Cruz si RNA Transfection Reagent转染试剂将Control siRNA(Flourescein Conjugate)-A转染至人卵巢癌SKOV3细胞中,统计其转染的效率。3、将细胞分成空白对照组、转染试剂对照组、干扰组和阴性序列对照组,以Santa Cruz siRNA Transfection Reagent转染试剂为载体将阴性对照Control siRNA-A和干扰片段NOB1P siRNA(h)分别转染至人卵巢癌SKOV3细胞中,而后观察各组细胞形态和生长状态。4、采用MTT法检测各组细胞的增殖情况。5、采用RT-PCR方法从检测转染后各组细胞NOB1mRNA的表达情况。6、转染后提取各组的总蛋白,通过Western blotting法检测各组细胞中NOB1蛋白质的表达量。7、用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况及细胞周期。结果:1、将Control siRNA(Flourescein Conjugate)-A转染至人卵巢癌SKOV3细胞后,发现经转染后的人卵巢癌SKOV3细胞中大多数都有绿色荧光蛋白的表达,且绿色荧光覆盖率80%以上。2、MTT结果显示,NOB1干扰组的人卵巢癌SKOV3细胞增值活力明显降低。3、RT-PCR检测各组NOB1基因mRNA表达量,较其他3组,NOB1干扰组中的NOB1表达量明显降低(P<0.05)。4、用Western blotting蛋白免疫印记法检测NOB1蛋白的表达量,相比较于的其他3组,NOB1干扰组中的NOB1表达量明显降低(P<0.05)。5、流式细胞仪检测凋亡结果显示NOB1干扰组细胞凋亡率明显升高(P<0.05);检测各组细胞周期结果显示,NOB1干扰组的G1期细胞数明显多于其他三组,说明NOB1干扰组的细胞停滞在G1期,难以进入S期。结论:干扰片段NOB1P siRNA(h)可以转染进入人卵巢癌SKOV3细胞中,NOB1P si RNA(h)可以抑制人卵巢癌SKOV3细胞中NOB1基因的表达,且可以抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡并且使其细胞周期阻滞在G1期。