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目的：端粒酶活化是细胞永生化的基础，90％左右的恶性肿瘤细胞均表达端粒酶，测定端粒酶活性很可能是一种有价值的恶性肿瘤诊断新方法。p53基因是重要的抑癌基因，其变异失活与肿瘤的发生发展关系密切。本研究通过检测胸/腹水脱落细胞端粒酶活性，并对恶性胸/腹水上清中p53基因变异进行分析，探讨它们对恶性胸/腹水的诊断价值，以期为良恶性胸/腹水的鉴别诊断提供有价值的分子生物学指标。 方法：收集40例诊断明确的新鲜胸/腹水标本，包括恶性胸水8例（肺癌6例、原发癌灶不明的恶性胸水2例），恶性腹水15例（原发性肝癌3例、卵巢癌6例、胃癌3例、原发癌灶不明的恶性腹水3例），良性胸水9例（结核性胸膜炎8例、心衰1例），良性腹水8例（肝硬化6例、胰腺炎2例）。胸/腹水离心后，上清用作p53基因变异分析，细胞团用作端粒酶活性检测。血性胸/腹水加蒸馏水低渗破坏红细胞。采用端粒重复序列扩增法（TRAP）检测端粒酶活性，扩增产物经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色显示结果。呈现间隔6bp的梯状条带为端粒酶阳性。阳性对照为肝癌细胞系SMMC-7721，阳性对照细胞提取液经65℃ 10min处理作为阴性对照。胸/腹水上清基因组DNA的抽提采用常规蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提法。同时提取胎盘组织DNA为正常对照。采用PCR技术扩增p53基因第5～8外显子，以银染色单链构象多态性（SSCP）技术分析PCR产物的基因变异，出现与正常对照不同的单链DNA条带或缺失者为阳性。同时收集病例的胸/腹水脱落细胞学检查结果及血清肿瘤标志物（AFP、CEA和SF）检测结果。 结果：23例恶性胸/腹水中21例端粒酶活性检测阳性，阳性率91.3％，其中9例细胞学检查阴性者端粒酶检测均为阳性；17例良性胸/腹水中仅2例端粒酶活性检测阳性，阳性率11.8％。恶性胸/腹水端粒酶检测阳性率明显高于良性胸/腹水（P＜0.001），也高于细胞学检查阳性率（60.9％）（P＜0.05）。端粒酶活性测定诊断恶性胸／腹水的敏感性为91．3％、特异性为88二％、阳性预测值为gi．3％。阴性预测值为88．2％、诊断符合率为90．0％，明显优于血清肿瘤标志物 （AFP儿EA／A／SF）检测结果o功．05必．01人从 17例恶性胸／腹水的微量上清中，能提取到足够的基因组DNA进行PCR反应，p53基因第54外显子均扩增成功，银染色SSCP分析显示8例阳性（缺失3例，异常条带5例），阳性率为47．l％，变异部位主要见于第5、7外显子。6例细胞学检查为阴性者有4例检测到p53基因变异：2例端粒酶检测为阴性者有1例也检测到…3基因变异。 结论： 1．绝大多数恶性胸腹水端粒酶活性检测为阳性，而绝大多数良性胸／腹水为阴性，提示恶性胸／腹水脱落细胞中存在端粒酶活性。 2．脱落细胞端粒酶活性检测对恶性胸／腹水的诊断具有良好的敏感性与特异性，可作为临床良性与恶性胸／腹水鉴别诊断的指标之一。 3．恶性胸／腹水标本离心后取微量上清，采用常规酚／氯仿法即可提取足量的DNA成功进行PCR反应。 4．银染色PCR毛SCP分析显示恶性胸／腹水上清p53基因第5必外显子存在一定程度的变异，且主要发生在第5、7外显子。 5．以恶性胸／腹水上清为标本进行p53基因变异分析，对细胞学诊断可能有补充作用，且在标本利用方面不影响细胞学检查。