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非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）,是一种排除由过量饮酒或其它对肝脏具有明确损害因素所引起的肝脏脂肪变性,或以显著肝脂肪蓄积为特征的临床病理综合征。二脒那秦（diminazene,DIZE）作为ACE2的激活剂可以激活RAS代偿通路,在肺动脉高压等疾病的临床治疗上已有较为广泛的应用,但其在NAFLD中的作用尚未见报道。本实验探讨了 DIZE对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂类代谢的影响及生化机制。实验包括以下几个方面:1.DIZE对高脂饲料饲喂诱导的非酒精性脂肪肝病大鼠的作用探讨探究了 ACE2激活剂DIZE在高脂饲料饲喂诱导的NAFLD大鼠中的作用。研究选用6周龄SPF级SD雄性大鼠,随机挑选8只大鼠饲喂普通饲料作为空白组,其余大鼠饲喂高脂饲料进行造模。4周后,选取24只造模成功的NAFLD大鼠随机分成3组,继续饲喂高脂饲料的同时按以下方法处理:1)模型组:灌胃等量生理盐水;2)DIZE组:灌胃15mg/kg·d DIZE;3)洛伐他汀组（LOV组）:灌胃15mg/kg·d洛伐他汀。空白组继续饲喂普通饲料,同时灌胃等量生理盐水。期间每2周进行一次眼眶采血,并测定血浆中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）含量。第10周葡萄糖耐量试验后,处死所有大鼠,采集血液,测定血液中TG、TC、HDL-C、LDL-C、ALT、AST、NEFA、AKP、LDH和TBA等生化指标含量。取肝脏,称重测定肝脏脏器指数,并取相同部位肝脏组织制作病理组织学切片。结果:1)成功建立了 NAFLD大鼠模型,模型大鼠表现体重和肝指数增高、血脂水平明显增高,出现严重的胰岛素抵抗和肝细胞脂肪变性。2)与模型对照组相比,灌胃DIZE可以有效降低NAFLD大鼠的体重和肝脏指数,改善胰岛素抵抗,显著提高NAFLD大鼠血浆中HDL-C的含量,同时显著降低血浆中TG、TC、ALT、AST、NEFA、AKP、LDH和TBA的含量。3)肝脏组织病理学显示DIZE能明显减少肝细胞内的脂肪沉积,改善大鼠肝细胞的脂肪变性。结论:灌胃DIZE对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠的胰岛素抵抗和肝脏脂肪变性等具有明显的缓解作用,其相关机理有待进一步研究。2.DIZE通过改变RAS两条通路的平衡状态对肝脏损伤产生保护作用研究DIZE对NAFLD大鼠肝脏ACE2的激活效果及其对RAS经典通路和代偿通路平衡状态的影响。实验分组和处理同上一章,取采集的肝脏进行如下实验:以ELISA方法检测肝脏组织匀浆中AngⅡ和Ang1-7的含量,并分析AngII/Ang1-7的比值变化;以RT-qPCR法和Western blot方法检测肝脏组织中ACE2的表达变化,并以Western blot方法检测各组大鼠肝脏组织中ACE、ACE2、AT1R和MasR蛋白的表达水平,分析ACE/ACE2的比值变化。结果:1)与空白组相比,DIZE组大鼠ACE2基因和蛋白表达水平明显升高;2)NAFLD时大鼠肝脏ACE/ACE2的表达失衡,经典通路ACE-AngⅡ-AT1R处于优势,AngⅡ含量显著升高,ACE和AT1R蛋白均表达上调,ACE2蛋白表达下调。DIZE灌胃极显著上调ACE2和MasR的蛋白表达水平,降低肝脏组织中AngⅡ的含量,下调ACE和AT1R的蛋白表达水平,并极显著降低NAFLD大鼠肝脏组织中AngII/Ang1-7和ACE/ACE2的比值。结论:DIZE可有效激活ACE2,高水平的ACE2通过降解AngⅡ生成Ang1-7,使RAS代偿通路处于优势,改善了高脂饲料饲喂诱导的NAFLD大鼠的胰岛素抵抗及肝脏的脂肪沉积。ACE2在NAFLD脂代谢紊乱发展过程中起到重要作用。3.ACE2/DIZE调控非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏脂代谢紊乱的生化机制初探上一章的研究发现DIZE通过激活ACE2缓解了 NAFLD大鼠肝脏的脂肪变性和脂肪沉积,本章将从ACE2对肝脏脂代谢影响的生化机制进行探讨。实验分组和处理同第三章,取采集的肝脏测定肝脏组织匀浆中TG、TC、HDL-C、LDL-C和NEFA的含量;RT-qPCR法检测肝脏组织中脂类合成和分解代谢途径关键酶和调控因子的mRNA表达;Western blot法检测肝脏组织中脂代谢调控因子SREBP1和PPAR的蛋白表达水平。结果:1)模型组大鼠肝脏组织中TG、TC和NEFA含量极显著升高,HDL-C和LDL-C含量升高但无显著性差异。相比于模型组,灌胃DIZE组大鼠肝脏组织中NEFA和LDL-C含量极显著或显著降低,HDL-C含量显著升高,TG、TC含量降低但无显著性差异。2)模型组大鼠肝脏组织中脂合成代谢关键酶ACC1、FAS、SCD-1和ME及调控因子SREBP-1 c基因均表达上调;脂分解代谢关键酶CPT-1、CPT-2、HSL和ACO及调控因子PPARα基因均表达下调。3)DIZE能够极显著下调NAFLD大鼠肝脏组织中SREBP1的蛋白表达水平,上调PPAR的蛋白表达水平。结论:NAFLD时大鼠肝脏组织发生脂代谢紊乱,外源性刺激物DIZE可能通过激活肝脏内源存在的ACE2,抑制脂肪酸的合成,刺激脂肪酸的分解,从而改善了 NAFLD大鼠肝脏的脂肪变性和脂肪沉积。综上,外源性ACE2激活物DIZE通过影响肝脏的脂代谢过程发挥一定的抗肝脏脂肪变性等损伤作用,对NAFLD具有一定的治疗作用。DIZE具有与抗脂肪肝药物LOV类似的作用,即本实验结果为DIZE作为ACE2的激活剂成为新的NAFLD治疗药物的开发提供了理论依据。