【摘 要】
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该课题组前期研究结果表明,离子通道蛋白带3蛋白具有肿瘤相关蛋白p16的结合位点,提示二者在功能上可能存在相互作用.为了进一步研究二者在哺乳动物细胞水平上是否存在功能上
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该课题组前期研究结果表明,离子通道蛋白带3蛋白具有肿瘤相关蛋白p16的结合位点,提示二者在功能上可能存在相互作用.为了进一步研究二者在哺乳动物细胞水平上是否存在功能上的联系,我们将p16和带3蛋白膜段结构域的cDNA亚克隆到哺乳动物表达载体pEGFP-C1和pDisplay上,经酶切和DNA测序鉴定后,利用DMIRE-C Reagent分别转染入HeLa细胞使其瞬时表达;通过倒置显微镜观察细胞转染后的细胞形态变化;应用荧光显微镜观察转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-p16细胞组的细胞转染效率;免疫细胞化学、Western bolt检测融合蛋白的表达及分布;通过绘制细胞生长曲线、流式细胞技术和SPQ荧光探针检测技术研究转染pEGFP-C1-p16和pDisplay-mdb3后HeLa细胞的生长状态和阴离子交换活性.结果表明,两种哺乳动物表达载体构建成功;表达的融合蛋白发挥正常的生物学功能;转染效率达60﹪以上;细胞转染后细胞形态没有明显变化.转染pEGFP-C1-p16和pDisplay-mdb3后,均导致HeLa细胞的增殖受到抑制,细胞增殖周期阻滞在G<,0>-G<,1>期,并且细胞的阴离子交换活性增强.该研究说明p16和带3蛋白跨膜结构域具有类似的生物学功能,二者在细胞水平上可能具有互补或协同作用.为下一步研究带3蛋白与细胞增殖以及与肿瘤发生、发展之间的关系奠定基础.
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