褪黑素(Melatonin，MT)是主要由松果腺分泌的吲哚类激素。它具有多种生理功能和药理活性。其中，褪黑素作为内源性催眠物质诱导生理性睡眠和调节睡眠-觉醒节律的作用尤其引人注目。为进一步阐明褪黑素催眠作用机制，本文重点研究了昼夜节律系统和GABA能神经系统对褪黑素催眠作用的影响，并将褪黑素与其它催眠物质配伍，以求开发出药效更好、副作用更小的褪黑素复方。 本文的研究发现灌胃给予褪黑素能够明显抑制小鼠自主活动，促进戊巴比妥钠阈下剂量25mg／kg的小鼠入睡率，延长小鼠戊巴比妥钠40 mg／kg睡眠时间。大鼠脑电图分析也表明腹腔注射褪黑素能够明显增加大鼠慢波睡眠、快波睡眠和总睡眠时间，缩短睡眠潜伏期和觉醒时间。褪黑素具有明显的镇静催眠作用。当机体昼夜节律系统功能正常时，在六个昼夜不同时间点给予12小时光照／12小时黑暗下生活的小鼠褪黑素后，延长小鼠睡眠时间的峰值出现在光照期开始，谷值出现在光照末期。对大鼠脑电图的分析也得出类似结果：光照期开始时褪黑素具有明显的催眠作用，而黑暗期开始时的作用较弱。提示褪黑素的催眠作用具有昼夜节律性。长期光照和松果腺摘除能破坏昼夜节律系统的正常功能。褪黑素延长长期光照和松果腺摘除组小鼠睡眠时间的作用明显强于正常小鼠。尽管晚8点时褪黑素对正常大鼠的催眠作用较弱，但给予长期光照大鼠褪黑素后则表现出明显的催眠效果，其作用程度与早8点对正常光照大鼠的催眠效果相当。提示当昼夜节律系统功能紊乱时，褪黑素能表现出更强的催眠作用。 褪黑素3(MT3)受体拮抗剂盐酸哌唑嗪1 mg／kg虽能增强褪黑素延长小鼠睡眠时间的作用，但两者之间无交互作用。提示褪黑素催眠作用可能是通过MT3受体以外机制实现。给予GABA合成酶抑制剂-盐酸氨基脲或L-苹果酸对睡眠无明显影响，但能明显抑制褪黑素的催眠作用。提示褪黑素催眠作用可能与激活GABA合成酶进而增加GABA的含量有关。GABA受体内源性激动剂GABA与褪黑素联合应用后，褪黑素的催眠作用明显增强，提示褪黑素的催眠作用可能有GABA受体的参与。进一步的研究发现，苯二氮革(艹卓)位点拮抗剂氟马西尼和氯离子通道阻断剂印防己毒素能明显拮抗褪黑素的催眠作用。GABA_A受体上GABA识别位点的特异性拮抗剂荷包牡丹碱与褪黑素合用后， 沈阳药科大学博士学位论文 摘要一褪黑素增加大鼠慢波睡眠、快波睡眠和总睡眠时间及减少觉醒时间的作用消失，但两者之间仅对快波睡眠有明显的交互作用。提示褪黑素的催眠作用可能由BZP识别位点和印防己毒素识别位点共同介导，GABA识别位点部分参与了褪黑素的催眠作用。本文应用纸电泳．双波长扫描法还进一步考察了褪黑素对小鼠不同脑区GABA含量的影响。结果发现催眠剂量的褪黑素能增加小鼠下丘脑中GABA的含量，而对脑干、大脑皮层、小脑中GABA的含量无明显影响。应用脑微透析技术结合高效液相色谱电化学检测发现褪黑素能明显增加大鼠下丘脑中GABA的释放。提示下规翩黑素发挥催眠作用的重要部位。以上结果提示，GABA能神经系统参与了褪黑素的催眠作用，褪黑素可通过激活GABA ～－－－ri而增力0下丘脑GABA的含量，促进下丘脑中GABA的释放，并通过GABAA gWI的不同拥u位点发挥催g即用。 本文还研究了褪黑素与另一个同样具有诱导生理性睡眠作用的内源性催眠物质油酚胶联合应用对睡眠的影响。两者联合应用对睡眠的影响较为复杂。低剂量褪黑素2．5 mg／kg和低剂量油酸胺 25 mg／kg单独使用都无明显的催眠作用，合用后催眠效果明显增强但无交互作用。提示，两者在此剂量下可能是通过不同的受体或识别位点发挥作用。当剂量增加时，合用后的催眠效果明显下降，高剂量褪黑素 10 wb和高剂量油酸胺 50mg／kg合用后催眠效果虽未达到统计意义的降低，但两者之间有明显的交互作用。推测剂量升高时，褪黑素和油酚胺可能共同作用于某一位点，但作用机制较为复杂，导致合用后催眠作用降低。 为了研制催眠效果更好，副作用更小的催眠药物，我们从中国传统中药中选择了具有镇静安神作用的酸枣仁和补肾壮阳功效的淫羊蕾与褪黑素进行配伍，结果发现此复方不仅增强了褪黑素的催眠效果，又弥补了其对生殖系统功能的抑制性影响。具有良好的应用前景。