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单克隆抗体(简称单抗)用于检测特异性物质,已成为生物学、医学等领域的重要工具。兔单抗相较于鼠单抗具有更高的亲和力,广泛用于科研和疾病诊断试剂盒。体外杂交瘤细胞培养是单抗制备的重要途径,传统培养基需要加入血清,易造成批次间差异和培养体系的不稳定,且存在一定的污染风险。本文针对兔单抗制备的工程细胞株,包括兔骨髓瘤细胞株和融合后的杂交瘤细胞株,开展无血清培养驯化,以去除培养基中血清成分。首先,选取四种不同种类的无血清培养基对兔骨髓瘤细胞株(240E-W2)进行无血清驯化培养,比较分析直接替换的速降方式和逐步替换的缓降方式,探讨不同驯化方式和不同的培养基的影响。发现1640AB培养基和CD Hybridoma Medium培养基按1:1配比,以缓降培养基内血清含量的方式,在贴壁培养的环境下从9%血清含量降至1%,经72h培养后细胞密度达4.0-5.0×105个/ml。其次,进行无血清悬浮培养驯化,提高初始接种密度为1.2×105个/ml,在悬浮培养条件下从1%血清含量成功降至0,经过72h培养后细胞密度可达4.0-6.0X 105个/ml,细胞状态良好。对细胞株进行多次亚克隆,挑选出最稳定的适应于无血清培养的兔骨髓瘤细胞株(240E-W2-SFM),建库保持。进一步筛选无血清冻存液,进行冻存复苏测试,以确保无血清冻存方式对细胞的生理活性没有负面影响。最后,完全适应于无血清悬浮培养的兔骨髓瘤细胞株(240E-W2-SFM)与兔脾脏细胞进行融合,构建杂交瘤细胞株,进行常规9%血清浓度培养和无血清同步维护对比,考察酶联免疫吸附阳性率,蛋白免疫印迹法阳性率、丢失率等,比较分析无血清培养对于杂交瘤细胞株的影响。结果表明,融合后的杂交瘤细胞株能完全适应1:1配比的1640AB和CD Hybridoma Medium无血清培养,阳性孔比例及分泌目标蛋白能力稳定,显示出良好的适应性和应用前景。本论文围绕兔单抗制备的重要工程细胞株,从去除培养基中血清成分出发,对相关细胞株进行驯化及培养基选择优化,证实了兔单抗制备工艺无血清化的可行性,为进一步应用打下了良好基础。