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河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是一种常见且危害较大的海洋生物毒素,广泛存在于海洋生物和陆栖等众多生物中,主要见于豚鱼类。豚鱼肉味鲜美,营养丰富,我国和日本等亚洲国家均有食用习惯,中毒事件频频发生,其快速检测方法的研究对预防河豚毒素中毒具有重要意义。本研究成功制备了TTX毒素人工完全抗原TTX-BSA、TTX-OVA;建立了分泌抗TTX毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株3D4和4C5,制备并纯化了单克隆抗体(TTX-McAb),对抗体效价、亚类、分子量、亲和力、敏感性、特异性等进行了测定;建立了以单克隆抗体为基础的间接竞争ELISA、胶体金免疫层析试纸条免疫学检测方法,并组装了ELISA检测试剂盒,其性能指标能满足快速、特异、敏感的食品检测要求。为进一步探索利用融合单链抗体的海洋生物毒素高通量筛检方法,对TTX和另外2种重要的海洋贝毒素石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)和大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)融合单链抗体进行了研究。利用已构建的杂交瘤细胞株,RT-PCR方法获得TTX-McAb的VH和VL基因,SOE-PCR方法组装单链抗体基因TTX-ScFv(VH-Linker-VL),构建其原核表达载体TTX-ScFv-22b和真核表达载体TTX-ScFv-PICZα,获得了相应的具有反应活性的表达蛋白;将3种海洋生物毒素TTX、OA、STX单链抗体基因进行串联,构建了融合基因表达载体OST-ScFv-22b,获得了相应抗3种毒素的融合单链抗体蛋白,经ELISA检测,与3种毒素反应活性较弱。如何提高融合单链抗体反应活性使其能够用于3种毒素的同步筛检方法,有待于进一步研究。