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结核性气道狭窄是目前我国最常见的良性气道狭窄,引起患者通气功能障碍和分泌物引流障碍,呼吸困难和阻塞性肺炎,严重者可出现呼吸衰竭,甚至窒息死亡,但是发病机制尚不清楚。气道炎症在气道狭窄中起重要作用,研究表明气管插管或气切后气管狭窄的发病与损伤后局部炎症及全身的炎症反应相关,使成纤维细胞在受损的气管上激活,产生持续或过度的成纤维细胞增殖,导致气道狭窄。本课题组前期研究亦表明,通过抑制炎症反应,下调炎症因子表达,可以抑制肉芽组织的过度增生和纤维化,有效减轻兔气管损伤后的气管狭窄。组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase2,HDAC2)是炎症反应调节的重要因素,研究证实红霉素等抗炎药物可以上调巨噬细胞、A549细胞的HDAC2的表达,减少炎症因子的释放。所以我们推测调节炎症反应的HDAC2可能与结核性气道狭窄密切相关,本课题将检测结核性气道狭窄患者全身炎症反应表达水平,评估结核性气道狭窄支气管组织中炎症反应表达水平和HDAC2在结核性气道狭窄支气管组织中的表达情况,同时分析结核性气道狭窄支气管组织炎症反应表达水平与HDAC2表达的关系,并研究成纤维细胞HDAC2对炎症因子的反应和调控作用。研究内容包括以下三部分:第一部分结核性气道狭窄患者全身炎症反应目的:检测结核性气道狭窄患者全身炎症反应的表达水平。方法:收集经湖南省胸科医院诊断的结核性增生性气道狭窄组、结核性瘢痕性气道狭窄组、正常组三组患者的术前血清标本60例,用ELISA的方法检测TGF-β1、VEGF、IL-6、IFN-γ的表达水平,比较各组的差异。结果:结核性增生性气道狭窄组和结核性瘢痕性气道狭窄组的血清TGF-β1、VEGF、IL-6、IFN-γ的浓度均高于正常组,结核性增生性气道狭窄组与结核性瘢痕性气道狭窄组和正常组间比较具有统计学意义(P<0.05),结核性瘢痕性气道狭窄组与正常组组间比较无统计学意义(P>0.05)。结论:支气管结核活动期全身增强的炎症反应与结核性气道狭窄的发生相关。第二部分组蛋白去乙酰化酶2在结核性气道狭窄组织中的表达目的:检测结核性气道狭窄组织中HDAC2的表达情况。方法:收集经湖南省胸科医院诊断的气管支气管结核患者的气道肉芽组织标本、气管支气管结核患者瘢痕支气管手术组织标本、因肺部病变手术后的正常支气管组织标本40例,用免疫组化方法检测TGF-β1、VEGF、NF-κB、HDAC2的表达情况,比较各组的差异,分析TGF-β1、VEGF、NF-κB与HDAC2表达的关系。用Western blot方法检测HDAC2的表达情况,比较各组的差异。结果:1.免疫组化结果显示结核性增生性气道狭窄组增生肉芽组织中TGF-β1、VEGF、NF-κB阳性表达率高于结核性瘢痕性气道狭窄组及正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);结核性增生性气道狭窄组和结核性瘢痕性气道狭窄组支气管组织中HDAC2阳性表达率低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示TGF-β1、VEGF和NF-κB的阳性表达率与HDAC2的阳性表达率呈负相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.Western blot结果显示结核性增生性气道狭窄组和结核性瘢痕性气道狭窄组支气管组织中HDAC2蛋白表达量低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:局部增强的炎症反应参与了结核性气道狭窄的发生,且与HDAC2的低表达相关,提示HDAC2可作为治疗结核性气道狭窄的潜在靶点。第三部分成纤维细胞HDAC2对炎症因子的反应和调控目的:探讨气管成纤维细胞HDAC2对炎症因子的反应和调控作用。方法:体外培养人气管成纤维细胞,分为正常对照(NC)组,TGF-β1(TGF-β1)组,红霉素1mg/L(EM1)组,红霉素10mg/L(EM10)组。TGF-β1组应用10ng/m L的TGF-β1刺激,EM1组及EM10组分别为TGF-β1刺激前2小时预先给予浓度为1mg/L及10mg/L的红霉素干预,用ELISA评估TGF-β1刺激及用药干预后24小时,细胞培养上清IL-8、TNF-α变化情况,用Western blot检测各组HDAC2表达情况,比较各组的差异。结果:1.同NC组相比,TGF-β1组细胞培养上清IL-8和TNF-α明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);EM1组和EM10组均能明显减低TGF-β1刺激后细胞培养上清IL-8和TNF-α浓度,差异有统计学意义(P<0.05),其中EM1组与EM10组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.TGF-β1组HDAC2蛋白的表达量稍低于NC组,差异无统计学意义(P>0.05),EM1组、EM10组的HDAC2蛋白的表达量高于TGF-β1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.气管成纤维细胞HDAC2在TGF-β1刺激下表达下调,减弱了对炎症因子表达的抑制作用。2.气管成纤维细胞HDAC2的表达经红霉素干预得到恢复和提升后,可抑制炎症因子表达。