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本文对hTSHR体外转染失分化型甲状腺癌细胞株后再分化的相关机制进行了实验研究。本研究分为两个部分：
目的：通过重组真核表达质粒pcDNA3.1/hTSHR 体外瞬时转染失分化型滤泡状甲状腺癌细胞株（FTC-133 亚型，sFTC-133）后，观察转染人的促甲状腺激素受体（human thyrotropin receptor，hTSHR）的细胞摄碘能力及分化相关基因mRNA的变化水平，以明确TSHR 对失分化型甲状腺癌细胞株再分化的作用和意义。
方法：重组真核表达质粒pcDNA3.1/hTSHR 转化DH5а 感受态菌，进行扩增，酶切，及核苷酸测序方法鉴定。体外转染重组pcDNA3.1/hTSHR 质粒，通过免疫荧光检测TSHR 的表达产物， 125I 摄碘实验检测摄碘能力，相对定量实时荧光聚合酶链反应（Realtime-PCR）来检测TSHR、钠碘转运体（NIS）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、甲状腺球蛋白(Tg) mRNA 相对含量。统计学检验方法采用SPSS 13.0软件，计量资料采用t 检验，P<0.05 为差异具有统计学意义。
结果：pcDNA3.1/hTSHR 经PCR 扩增 hTSHR-cDNA 片段约113kb，Kpn I 和XbaI 双酶切后：hTSHR-cDNA 的片段约2.3 kb，pcDNA3.1(+)的片段约5.5 kb，均同预期片段大小相符；核苷酸测序方法鉴定测序结果与GenBank 中收录的hTSHR全长序列一致，表明真核表达质粒构建正确。在hTSHR 刺激下，转染pcDNA3.1/hTSHR 的细胞与转染pcDNA3.1(+)的细胞比较：①免疫荧光检测在甲状腺肿瘤细胞胞浆、胞膜有增强的绿色荧光，②125I 摄取率是对照组的2.9 倍（t=28.63，P<0.01），③甲状腺碘摄取相关基因TSHR、NIS、TPO、Tg mRNA的表达分别升高1.7 倍(t=13.8, p<0.05)，4 倍(t=28.52, p<0.05)，1.5 倍(t=14.43,p<0.05)，2.2 倍(t=19.83，p<0.05)。
结论：重组真核表达质粒pcDNA3.1/hTSHR 体外转染甲状腺癌肿瘤细胞后，可有效提高碘的摄取及分化相关基因的表达，为失分化甲状腺癌放射性碘治疗提供了一个新的依据。
第二部分：
目的：构建hTSHR 基因的的重组慢病毒表达载体，并感染失分化型滤泡状甲状腺癌细胞株（FTC-133 亚型，sFTC-133），观察hTSHR 的表达，并构建稳定表达hTSHR 的sFTC-133 细胞。
方法：运用巢式PCR 技术对重组真核表达质粒pcDNA3.1/hTSHR 中突变位点C进行诱变回正常的序列G，经PCR 扩增反应获得hTSHR 基因，并将其连接到含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的慢病毒表达载pGC-FU 中，重组获得慢病毒质粒pGC-FU-hTSHR，经PCR 扩增反应和DNA 测序方法鉴定重组体，鉴定正确的重组体将其与辅助包装质粒（pHelper 1.0 载体，pHelper 2.0 载体）一起共转染293T 细胞，包装生产病毒并测定病毒滴度。所获慢病毒感染失分化型甲状腺癌细胞株后，采用荧光显微镜的方法检测hTSHR 的表达。
结果：PCR扩增实验证实hTSHR 基因已定向连入慢病毒表达载pGC-FU 目的载体，DNA 测序结果显示，所构建的pGC-FU-hTSHR 重组慢病毒质粒序列与目标序列完全一致, 表明重组质粒pGC-FU-hTSHR 已构建成功，且获得的病毒滴度为2×108 TU/ml。 重组pGC-FU-hTSHR 感染失分化型滤泡状甲状腺癌细胞株后，可见大量EGFP 表达，与对照组相比，hTSHR 的表达量明显增加。
结论：成功构建了hTSHR基因过表达的慢病毒表达载体及高表达hTSHR的sFTC-133细胞株。