研究分为六部分： 1 异亚丙基莽草酸对人脐静脉内皮细胞增殖活性及NO、PGI₂分泌的影响 目的：研究异亚丙基莽草酸（3,4-oxo-isopropylidene-shikimicacid,ISA）对体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）增殖活性及NO、PGI₂分泌的影响。方法：用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性；硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO水平；放射免疫法测定细胞培养液中前列环素代谢物6-酮-前列腺素F_1α(6-keto-PGF_1α含量。结果：ISA与HUVEC共同孵育24 h对HUVEC的增殖活性和NO释放没有明显的影响。ISA10^-4mol·L^-1．作用于HUVEC 24 h后，培养液中6-keto-PGF_1α的含量明显高于对照组，其余各剂量组对6-keto-PGF_1α的释放无明显影响。结论：ISA可促进HUVEC释放前列环素。 2 异亚丙基莽草酸对H₂O₂损伤血管内皮细胞的保护作用 目的：以H₂O₂诱导HUVEC损伤，研究ISA对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法：倒置显微镜下观察细胞形态学改变；MTT比色法检测细胞活性；采用硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO水平；放射免疫法测定细胞培养液中6-keto-PGF_1α含量；比色法测定培养液及细胞裂解液的乳酸脱氢酶（LDH）活性并计算LDH的释放率。结果：H₂O₂(50、100、200μmol·L^-1分别与HUVEC孵育4h，呈剂量依赖性降低内皮细胞的存活率。ISA10^-4、10^-5mol·L^-1预孵HUVEC6h，可减轻H₂O₂(200μmol·L^-1引起的细胞活性降低和LDH释放，促进H₂O₂诱导的血管内皮细胞释放NO和前列环素。ISA还可明显改善H₂O₂所致的内皮细胞变形、皱缩等损伤表现。结论：ISA对H₂O₂损伤血管内皮细胞具有保护作用。 3 异亚丙基莽草酸对H₂O₂诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响 目的：研究ISA对H₂O₂诱导HUVEC凋亡的影响并探讨其机制。方法：用AnnexinV-PI染色流式细胞仪检测法和原位末断标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率；免疫细胞化学法检测抗凋亡基因Bcl-2的表达。结果：流式细胞仪检测显示，100、200 μmol·L^-1H₂O₂刺激HUVEC 6h后，可使细胞早期凋亡率由8.38％增加至13.23％、19.39％，晚期凋亡和坏死率也有所增加。但当H₂O₂终浓度增加到400 μmol·L^-1时，HUVEC的早期凋亡率反而降低至10.27％，但晚期凋亡和坏死率增加。给予ISA10^-4、10^-5mol·L^-1预孵6h，可降低H₂O₂(200 μmol·L^-1所致的早期凋亡率和晚期凋亡及坏死率。TUNEL法检测显示，ISA10^-5mol·L（-1）预孵HUVEC 6h可明显降低H₂O₂(100μmol·L^-1所致的细胞凋亡，使凋亡率由15.9％降至11.5％。此外，正常体外培养的HUVEC未见Bcl-2的表达，ISA10^-4、10^-5 mol·L^-1孵育HUVEC 12 h仍未见Bcl-2的表达。结论：ISA对H₂O₂诱导HUVEC凋亡有明显的抑制作用，其机理与上调凋亡抑制基因Bcl-2无关。 2 异亚丙基莽草酸对内皮细胞活化的影响及机理研究 4异亚丙基莽草酸的抗氧化作用研究 目的：研究ISA的体外抗氧化作用。方法：采用体外自由基捕捉实验检测ISA对 超氧阴离子和羟自由基的清除率；采用硫代巴比妥酸微量法测定丙二醛；黄缥吟氧化酶 法测总超氧化物歧化酶（SOD）；可见光法测过氧化氢酶（CAT）。结果：ISA 10”二10“’ mol＊’对超氧阴离子有明显的清除效果，并呈现出量效关系，其清除率分别为 9．5％、 20刀％、34．5％。ISA＊0”’mol·L勺对羟自由基也有一定的清除作用，清除率为 18．4％。 H刃。200 P moll‘与 HUVEC共同孵育 6h后，显著加剧细胞膜的脂质过氧化反应，表 现为增加 MDA生成；还使细胞内 CAT和 SOD活性减低。当预先用 ISA10－‘、106mol．L－‘ 培养 HUWC 6 h，H。O。对 HUWC的损伤作用明显减弱，MDA产生减少，C叮和 SOD 活性受到保护。但 ISA孵育 HUVEC 12 h，对 SOD和 CAT活性没有直接的影响。结论： ISA具有体外抗氧化作用，对抗氧化酶SOD和CAT的活性无直接影响。 5异亚丙基莽草酸对比。激活内皮细胞与中性粒细胞貂附及内皮细胞劾附分子表达的影 响 目的：观察H。O。激活内皮细胞与中牲粒细胞（PMN）劾附的作用，H。O。对内皮 细胞励附分子表达的影响及ISA的于预作用。方法：采用孟加拉玫红染色法研究PMN 与HUVEC 4t附；cell．ELISA法研究HUVEC ti附分子的表达；RTPCR法研究细胞间 瓢附分子＊（ICAM＊）的 mRNA表达。结果：H。O。50、100卜mol＊‘与 HUVEC孵育 4h可明显诱导HUVEC与PMN的粘附。ISA（10－’、10－‘mol·L“’）预孵HUVEC6h可抑 制 H。O。（100卜mol·LI）诱导内皮细胞与 PMN的劾附。其抑制率分别为 26．2％、41＊％。 ISA与HUVEC孵育18h，对静息状态下HUVEC 与PMN 的劾附没有影响。 H。O叶00卜mol·L”’刺激 HUVEC 4 h可明显增加 ICAM＊的表达。对 E－选择素和血管细胞 间虱附分子l（VCAM刁）的表达没有影响。ISA(10－＼ 10－‘mol·L一预孵 6 h可抑制 H。O。诱导的