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背景与目的: 过敏性哮喘(allergic asthma)是气道慢性炎症，由对外部刺激不适当的免疫应答引起。哮喘以气道高反应性(AHR)，粘液分泌增加，嗜酸性粒细胞和肥大细胞增多，气道重塑为特点。现在全世界大约有3亿患者，每年25万人死于此病，据估计到2025年将新增哮喘患者1亿人。传统的观点认为，过敏性哮喘的发生是由辅助性T细胞(helper T cell，Th)功能失调，Th2细胞过度活化所致。最近发现的一类2型固有淋巴细胞(group2 innate lymphoid cells，ILC2)，当受到上皮来源的促Th2细胞因子刺激时，产生大量Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-9、IL13)，对过敏性气道炎症中Th2细胞的中心作用提出了挑战。ILC2在2型免疫应答中起重要作用，在蠕虫感染中ILC2快速扩增，先于适应性Th2应答。本试验研究未致敏小鼠肺部是否有ILC2细胞，与其它部位存在的该类细胞在表型和功能上有何差异，以及分析在菠萝蛋白酶加OVA诱导的气道炎症模型中ILC2的作用。 方法: 1.菠萝蛋白酶诱导小鼠气道炎症模型建立。 2.用流式细胞技术分析肺单细胞悬液或BAL沉渣细胞，分选纯化ILC2，并分析肺部ILC2的表型。 3.应用ELISA方法检测小鼠BAL、肺组织匀浆中多种细胞因子的水平，血清中OVA特异性IgE抗体。 4.不同细胞因子组合刺激纯化的肺ILC2，ELISA检测培养上清中2型细胞因子的产生。 5.对BAL细胞和肺组织白细胞进行流式细胞分析和细胞计数。 6.肺组织HE染色和PAS染色，检查肺部炎症反应和杯状细胞黏液产生。 结果: 1.在正常未致敏小鼠肺部，鉴定出一群Lin-Sca-1+c-kit+/loCD25+CD127+细胞，P/I刺激下可分泌2型细胞因子。 2.LNH细胞不表达成熟造血谱系细胞标志，而表达CD45、CD90.2(Thy1.2)、ST2和ICOS分子。 3.在激活纯化LNH细胞时，必需有IL-33参与，但需要与IL-2、IL-7或TSLP共同应用;IL-25单独或加IL-33不能激活LNH细胞。 4.在菠萝蛋白酶刺激下，WT、Rag1-/-小鼠的BAL嗜酸性粒细胞计数明显升高，BAL上清IL-5和IL-13明显升高，NSG小鼠不升高。PAS染色显示在菠萝蛋白酶刺激的WT、Rag1-/-小鼠肺部的气道杯状细胞有粘液产生，而NSG小鼠肺部显示没有粘液产生。 5.未致敏小鼠气道接触菠萝蛋白酶，促进肺IL-33和TSLP产生，协助无害抗原OVA诱导产生Th2型免疫应答。 结论: 1.在未致敏小鼠肺部发现一群Lin-Sca-1+c-kit+/loCD25+CD127+ILC2细胞，可表达CD45、CD90.2(Thy1.2)、T1/ST2和ICOS分子。 2.在P/I或细胞因子组合刺激LNH细胞，可快速产生2型细胞因子。 3.细胞因子组合激活LNH细胞时，必须有IL-33参与。 4.成功建立OVA加菠萝蛋白酶诱导过敏性气道炎症的模型。