SDF-1α复合Pluronic F-127对BMSCs体外诱导成骨的实验观察

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目的以Pluronic F-127为支架材料,构建装载基质细胞衍生因子-1α(stromal cellderived factor-1α,SDF-1α)的Pluronic F-127新型复合材料,探讨其对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的体外趋化作用,并将PluronicF-127与BMSCs复合培养,观察两者间生物相容性,进而研究复合SDF-1α水凝胶对BMSCs诱导分化成成骨细胞的影响。研究方法构建装载不同浓度SDF-1α(200、50ng/ml)的Pluronic F-127复合水凝胶,采用Transwell小室法进行复合水凝胶对BMSCs的体外趋化实验,通过对迁移BMSCs的计数与统计分析,筛选出趋化作用较好的复合水凝胶。将BMSCs与筛选出的复合水凝胶均匀混合培养,用MTT法检测复合培养后细胞的活性状况。将BMSCs与筛选出的复合水凝胶混合均匀,待凝胶形成后加成骨诱导液进行培养,同时分别设置单纯BMSCs的成骨诱导液培养和完全培养基培养,对以上各行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性测定及茜素红染色,观察并记录各检测结果,分析各BMSCs的成骨诱导分化情况。结果趋化结果显示,含SDF-1α浓度为200ng/ml的复合水凝胶对BMSCs的募集效果显著,与含SDF-1α浓度为50ng/ml的复合水凝胶相比,其趋化下室滤膜表面的细胞转移数目明显增多(P<0.05)。MTT法证实Pluronic F-127对细胞增殖不产生影响,BMSCs-水凝胶复合培养与单纯BMSCs培养相比,两者间细胞活性差异并无统计学意义(P>0.05)。AKP活性测定表明,BMSCs-复合水凝胶、单纯BMSCs在成骨诱导培养条件下,两者中细胞的AKP表达量均明显增高,并且都高于非成骨诱导组(P<0.05),同时经成骨诱导液培养的细胞,在镜下均可见明显的橘红色钙结节团块,而非加成骨诱导液培养的细胞,镜下则未见钙结节形成。结论成功构建装载SDF-1α的Pluronic F-127新型复合材料,其在体外对BMSCs有明显的趋化作用,在Pluronic F-127水凝胶中,BMSCs能够存活较好并能进行正常的生长及增殖,并且在细胞-复合水凝胶复合培养的三维支架中,BMSCs能够被成功诱导分化为成骨细胞。
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