环孢菌素A菌株选育及生产工艺研究

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本文首先根据推理选育方法建立一个初步的“去磷酸盐调节”的筛选模型。通过对环孢菌素A菌体原生质体进行诱变处理,在含磷酸盐(结构类似物砷酸盐)梯度含量的平板上进行筛选,筛选得到的突变菌株。再经过一个“终产物抗性”模型进行筛选,得到一株对较高磷酸盐浓度和终产物具有耐受性的突变株。 筛选得到的突变株在含有较高磷酸盐浓度配方中,合成环孢菌素A的能力较原株提高了近80%,达到2600μg/ml。其次,对筛选得到的突变株的斜面、种子、发酵配方和发酵条件等进行优化,使得突变株产环孢菌素A能力进一步提高到3000μg/ml。 本文还对由突变株发酵得到环孢菌素A的分离纯化工艺开展了研究,考察了环孢菌素A的预处理、提取、萃取、层析、结晶等工艺条件,使环孢菌素A纯化收率达到45%,较原工艺提高20%,成品经四大光谱鉴定,纯度符合要求,结构与USP对照品一致。
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