黄芪多糖对免疫抑制小鼠抗氧化能力及海马的保护作用

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目的通过注射环磷酰胺(CTX)建立成年小鼠免疫抑制模型,检测黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)给药对免疫抑制小鼠海马组织结构及Bax、Bcl-2在海马表达的作用;并通过检测各组小鼠体重、肝组织中总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性及丙二醛(Malonic Aldehyde,MDA)含量的变化,探讨不同剂量APS对Bax和Bcl-2参与免疫抑制小鼠海马损伤及恢复的作用机制,进而探索APS的抗氧化作用及对海马的神经保护作用。方法1.构建小鼠免疫抑制模型及分组:160只健康雄性昆明小鼠,随机分为4组:对照组(Control group)、环磷酰胺组(CTX group)、环磷酰胺+多糖低剂量组(CTX-L group)与环磷酰胺+多糖高剂量组(CTX-H group)。2.每周测量一次体重;最后一次给药处理后,取小鼠肝脏组织,用比色法测定各组小鼠肝脏T-AOC、SOD、CAT的活力及MDA含量。3.组织学观察:采用甲苯胺蓝Nissl染色法观察免疫抑制及APS给药后海马CA1区和CA3区存活神经细胞的数量及形态变化。4.免疫阳性反应产物定位:应用免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)观察Bax和Bcl-2在各组小鼠海马CA1区和CA3区免疫阳性反应产物表达位置、数量及强弱的变化。5.蛋白表达定量检测:应用蛋白质印记法(Western-blotting,WB)检测各组小鼠海马Bax和Bcl-2表达的不同,并用Quantity one对条带灰度值进行分析,比较Bcl-2/Bax比值的变化。结果1.从建模第二周开始,CTX组体重明显较对照组轻,而APS组体重和对照组无明显差异。2.黄芪多糖可显著提高免疫抑制小鼠T-AOC、SOD及CAT的活力,明显降低MDA含量。3.Nissl染色结果表明:CTX诱导的免疫抑制能导致海马CA1和CA3区存活的神经元的数目减少,而CTX-L和CTX-H组存活的神经元明显升高。4.免疫组化结果表明:CTX组海马CA1和CA3区的Bax阳性表达明显高于对照组,APS给药能明显降低Bax的阳性表达;CTX-L和CTX-H组海马CA1和CA3区的Bcl-2阳性表达明显高于对照组。5.Western blotting结果表明:CTX所致免疫功能低下小鼠海马Bax蛋白表达明显高于对照组,而CTX-L和CTX-H组Bax蛋白表达与CTX组相比明显降低;CTX组Bcl-2/Bax的比值显著低于对照组,而CTX-L和CTX-H组小鼠海马Bcl-2/Bax比值极显著高于CTX组。结论1.APS给药能纠正CTX所致免疫功能低下造成的体重减轻。2.APS可显著提高免疫抑制小鼠T-AOC、SOD及CAT的活力,明显降低MDA含量,通过改善机体的氧化还原状态调节机体的免疫状态。3.APS给药能增加海马CA1和CA3区存活的神经元的数量,修复受损的神经元;明显降低免疫抑制小鼠海马CA1和CA3区Bax的阳性表达;而且Bcl-2/Bax的比值极显著高于CTX组,表明APS可能是通过Bax和Bcl-2途径所介导的抗细胞死亡的一种潜在的神经保护剂。
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