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第一部分 含血栓调节蛋白基因真核表达质粒的构建 目的 构建人血栓调节蛋白（human thrombomodulin，hTM）基因的真核表达质粒，为研究hTM基因在抗血栓、抗炎症、抗血管内膜增生等方面的作用及其临床应用奠定物质基础。 方法 用PCR法从人基因组中扩增出hTM基因全表达片段。把载体质粒pcDNA3.1（+）／neo和hTM片段用EcoR Ⅰ+HindⅢ双酶切，T1DNA连接酶进行连接。连接产物转化感受态大肠杆菌菌株DH5?，在抗生素平板上筛选培养。挑取阳性克隆扩大培养后抽提重组质粒，用酶切法、PCR法和末端终止测序法进行鉴定。 结果 从人基因组中克隆出一条约1700bp的条带，与目的片段的碱基数相符。重组质粒经提取、纯化后用HindⅢ、EcoR Ⅰ重新酶切可切出约为5400bp和1700bp两条片段。以重组质粒为模板的PCR可扩增出约1700bp条带。测序鉴定后与公开发表的序列对照，完全吻合。证明hTM基因全表达片段已被完整、正确的插入到pcDNA3.1（+）／neo质粒中。 结论 成功构建了含有hTM基因全表达片段的真核表达质粒—pcDNA3.1／hTM。