【摘 要】
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本试验对人肝癌细胞(SMMC-7721)进行体外常规细胞培养,通过添加不同浓度氧化苦参碱(0.5-3.5g/L)作用不同时间后,运用MTT比色法观察细胞体外生长状况;吉姆萨染色在光学显微镜
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本试验对人肝癌细胞(SMMC-7721)进行体外常规细胞培养,通过添加不同浓度氧化苦参碱(0.5-3.5g/L)作用不同时间后,运用MTT比色法观察细胞体外生长状况;吉姆萨染色在光学显微镜下观察细胞的凋亡情况;流式细胞仪技术测定细胞周期的变化;在此基础上进一步采用免疫组化和荧光定量RT-PCR方法测定p53和STAT3表达变化情况,来研究不同浓度氧化苦参碱在细胞分化和基因表达调控方面抑制癌细胞生长的作用。试验结果:体外培养的SMMC-7721,随着氧化苦参碱浓度的加大和作用时间的延长,抑制率不断上升;与此同时,细胞核皱缩;细胞结构模糊不清;凋亡细胞数量增多;大量细胞脱落,而且经氧化苦参碱处理的SMMC-7721阻滞于G0/G1期,免疫组化结果显示,不同浓度氧化苦参碱组与对照组相比,p53蛋白阳性表达率不断升高,STAT3蛋白阳性表达率不断下降,荧光定量RT-PCR结果显示,不同浓度氧化苦参碱组与对照组相比p53 mRNA表达水平上升,STAT3 mRNA表达水平下降,两者呈负相关(P<0.01),差异显著(p<0.05)。结论:(1)氧化苦参碱对体外培养的SMMC-7721抑制效果具有时效依赖性,以2.0g/L浓度最佳,48h好于24h。(2)氧化苦参碱使SMMC-7721阻滞于G0/G1期,不能合成细胞生长所需的DNA,从而达到抑制肿瘤生长的作用。(3)氧化苦参碱可通过影响p53、STAT3蛋白阳性表达率来抑制癌细胞生长,两者呈负相关,p53阳性表达率不断升高,STAT3阳性表达率不断下降。(4)氧化苦参碱可使SMMC-7721中p53 mRNA表达水平不断上升,STAT3 mRNA表达水平明显的降低,48h较为明显,2.0g/L效果最佳。
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