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本项研究对比三种传统提取水蛭素的方法,采用仿生法刺激活体水蛭使其分泌出唾液,瞬间收集水蛭唾液,然后应用超滤对唾液进行高效快速膜分离纯化,再经离子交换和凝胶过滤层析中间纯化,最后应用高效液相进一步纯化得到高纯度的水蛭素,达到多次高效提取水蛭素的目的。
其中传统提取水蛭素的方法采用硫酸铵沉淀法、PH值沉淀法、有机沉淀法;活体诱导采用猪血+田螺联合诱导的方式诱导出水蛭唾液,然后再收集水蛭唾液。粗级分离比较了PH值沉淀法、硫酸铵沉淀法、有机沉淀法及超滤膜分离法。DEAE-纤维素离子交换层析用0.05mol/L,pH6.0磷酸盐缓冲液平衡,0-1.0mol/LNacl梯度洗脱,流速30mL/h,进样量为100ml。所得到的水蛭素溶液蛋白质回收率为6.05%,活性回收率为78.86%,纯化倍数为17.34,比活为201.59ATU/mg。SephadexG-25凝胶过滤树脂层析,以30mL/h的流速效果最好,其收集液比活为1132ATU/mg,蛋白质回收率为8.020,活性回收率为71%,纯化倍数为8.83ATU/mg。HPLC检测水蛭素纯度为92.10%。
该工艺的研究,不但保护了黑龙江省医学的自然资源,极大的促进和带动水蛭人工养殖业的发展,也为周边经济增加了新的经济增长点,同时为我国天然水蛭素的产业化开发提供了技术理论依据,使有限的水蛭自然资源达到可持续利用的目的。因此,该项研究在充分挖掘天然水蛭自身潜在的经济价值外,还推动了水蛭养殖业的发展,必将为我国农业产业结构调整和农业增效,农民增收作贡献。