为了对本实验室构建的柔嫩艾美耳球虫pVAX1.0-TA4-IL-2DNA疫苗进行安全性评价，开展了该疫苗的中间试验的生物安全性试验。　　 按照对最小使用日龄靶动物、各种接种途径的1次单剂量接种的安全试验要求，将试验动物分为按接种途径的不同分为空白对照组、滴鼻点眼组、口服组、翼下静脉注射组、颈部皮下注射组、腿部肌肉注射组共6组，每羽25μg，于1日龄接种一次；按照对靶动物单剂量重复接种的安全试验要求，将试验动物分为疫苗注射组和非免疫空白对照组共2组，每羽25μg，分别于7日龄、14日龄、21日龄3次进行腿部肌肉注射；按照3批制品对靶动物1次超剂量接种的安全试验要求，将试验动物分为第一批疫苗组、第二批疫苗组、第三批疫苗组和空白对照组共4组，每羽75μg于14日龄进行腿部肌肉注射接种1次；按照对其他非靶动物的安全性试验要求，采用的试验动物为成熟小白鼠共10只，每只25μg于30d进行腿部肌肉接种一次。免疫之后每天观察精神状态、饮水、进食、粪便及死亡情况等；免疫前、免疫后1周后每隔2～4周多点采集受试点周围水体，其余样品均于免疫程序完成后每间隔2～4周采集，主要包括鸡粪便以及心、肝、肾、脾、肠、睾丸、注射部位等组织，并以卡那霉素筛选水体和粪便中抗性菌落。根据该质粒DNA疫苗中TA4基因序列分别设计并合成引物，以PCR方法检测TA4基因和卡那霉素抗性基因是否发生转移以及质粒DNA是否经机体主要代谢物被排放到外界环境中、质粒或其主要元件在上述脏器组织的分布和存留时间及是否整合入组织染色体，并分析疫苗对其子代的影响；制备心、肝、肾、脾、肠、睾丸等组织石蜡切片，观察质粒DNA能否导致机体产生病理损伤。　　 结果显示，受试动物未出现任何异常临床生理反应；DNA疫苗携带的TA4基因和抗性基因未转化入肠道菌群；质粒DNA没有被排放到外界环境中；在心、脾、肾和注射部位均能检测到质粒DNA或其主要元件，并分别能存留约在免疫后的8周左右，免疫后8周直到免疫后22周一直未检测出质粒DNA或其主要元件，但在主要代谢器官肝脏中一直未检测到质粒DNA或其主要元件；质粒DNA未与染色体DNA发生整合；上述主要脏器及组织均未出现病理学变化。　　 上述安全性评价说明，该DNA疫苗具有较高的安全性，符合农业部《农业转基因生物安全管理条例》的要求。