PEF结合酶法提取鲍鱼脏器粗多糖及其抗氧化活性研究

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鲍鱼(Abalone),种属原始海洋贝类,位列八大“海珍”之一,不仅营养丰富,且具有极高的药用价值。而占有鲍鱼三分之一重量的肠腺、性腺等脏器在加工过程中多数被废弃或变成低价产品,造成了资源的极大浪费。本研究选用鲍鱼脏器为实验材料,采用高压脉冲电场(Pulsed electric fields,PEF)提取技术结合传统酶法提取鲍鱼脏器粗多糖(Abalone visceracrude polysaccharide,AVCP),研究最佳提取工艺。并从体外常规测定、体外细胞水平测定和小鼠体内实验层层递进研究所提多糖物质的抗氧化功能,为鲍鱼脏器多糖药用价值的进一步研究和鲍鱼脏器高值化开发利用提供一定的实验依据和理论基础。本研究包括:1、鲍鱼脏器粗多糖提取工艺的优化方法:以单因素实验确定PEF处理的关键参数、工作酶的种类。在单因素实验的基础上,通过正交实验研究时间、料液比、加酶量和温度对鲍鱼脏器粗多糖提取的影响,研究PEF结合酶法提取鲍鱼脏器粗多糖的最佳工艺。结果:①PEF提取部分:高压脉冲电场电场强度为30kV/cm,脉冲数为12。②酶法提取部分:采用中性蛋白酶,提取时间2.5h、料液比1:6、加酶量2.4×104U/g、温度55℃。③鲍鱼脏器粗多糖粉末的多糖含量为60.39%。2、鲍鱼脏器粗多糖体外抗氧化活性研究方法:以体外常规方法研究鲍鱼脏器粗多糖的体外抗氧化活性。①采用铁氰化钾还原法测定鲍鱼脏器粗多糖的总还原能力;②采用邻二氮菲-Fe2+-H2O2法测定鲍鱼脏器粗多糖对羟自由基(·OH)的清除能力;③采用邻苯三酚自氧化法测定鲍鱼脏器粗多糖对超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力。结果:①鲍鱼脏器粗多糖的还原能力与多糖浓度呈一定的量效关系,随着浓度的增加,多糖的还原能力也不断增大。②鲍鱼脏器粗多糖对·OH清除率与浓度呈一定的剂量依赖性,在多糖浓度为10mg/mL时,对·OH的清除率达到25.25%,IC50=20mg/mL,回归方程为y=0.025x+0.000,R2=0.995。③高浓度鲍鱼脏器粗多糖对邻苯三酚自氧化反应有抑制作用,对O2-·的清除效果不突出,20mg/mL时的清除率仅为25.40%,IC50=41.5mg/mL,回归方程为y=0.012x+0.002,R2=0.987,但仍表明其具有抗氧化作用的潜能。3、鲍鱼脏器粗多糖体外细胞水平抗氧化活性研究方法:采用H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激模型,进一步从体外细胞水平研究鲍鱼脏器粗多糖的体外抗氧化活性。①MTT法检测给药处理后氧化损伤细胞存活率;②测定细胞内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果:①MTT实验结果显示,在终浓度为1080μg/mL范围内,鲍鱼脏器粗多糖可将氧化损伤细胞存活率由71.59%提高至84.32%,说明具有保护作用,具备抗氧化潜能;②各组MDA含量均显著降低(P<0.01),并具有一定的治疗效果;各组SOD活力也显著提高(P<0.01),表现出不俗的预防效果。4、鲍鱼脏器粗多糖体内抗氧化活性研究方法:采用D-半乳糖诱导衰老小鼠模型,通过小鼠体内实验研究鲍鱼脏器粗多糖的体内抗氧化活性。①测定小鼠血清、肝匀浆中丙二醛(MDA)含量;②测定小鼠血清、肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活力;③测定小鼠血清、肝匀浆中谷胱甘肽(GSH)含量。结果:高剂量的鲍鱼脏器粗多糖能极显著降低D-半乳糖诱导的衰老模型小鼠血清和肝脏中MDA含量(p<0.01),极显著增加小鼠血清和肝脏中SOD的活力(p<0.01)。能够极显著提高小鼠血清中GSH的含量(p<0.01),显著提高小鼠肝脏中GSH的含量(p<0.05)。且各指标的影响效果与鲍鱼脏器粗多糖的给药量存在良好的量效关系,表现出突出预防效果的同时,高剂量组还有明显的治疗作用,说明鲍鱼脏器粗多糖存在体内抗氧化活性。
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