【摘 要】
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紫外辐射敏感蛋白RAD23(radiation sensitivity protein-23)是一种类泛素蛋白,可以参与核酸损伤修复,调控细胞应激反应和生长发育。同时RAD23也是UBL-UBA家族中的一种转运蛋白,
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紫外辐射敏感蛋白RAD23(radiation sensitivity protein-23)是一种类泛素蛋白,可以参与核酸损伤修复,调控细胞应激反应和生长发育。同时RAD23也是UBL-UBA家族中的一种转运蛋白,转运泛素化底物至蛋白酶体,而自身不会被降解。在植物中,RAD23蛋白的功能尚不明确,因此,本文以‘秦冠’苹果为研究对象,克隆得到了MdRAD23D1。利用生物信息学对该基因进行分析,同时利用实时定量技术分析该基因在不同逆境胁迫下的表达模式,此外,本文还利用了转基因技术鉴定该基因在植物响应干旱及高温胁迫中的功能。所得的研究结果如下:1)苹果MdRAD23D1基因的开放阅读框(ORF)为1170 bp,编码一个由389个氨基酸组成的类泛素蛋白,相对分子质量为40.945 kD,包含两个UBA结构域,一个UBL结构域和一个XPC/RAD4结构域。MdRAD23D1定位于细胞质和细胞膜。2)在不同逆境处理下,MdRAD23D1表达模式各异。ABA处理能明显诱导MdRAD23D1的表达,并在3 h时表达量达到最高值;碱胁迫下MdRAD23D1表达上调;干旱同样能诱导MdRAD23D1上调表达;持续盐处理过程中,MdRAD23D1的表达被抑制,并在12 h下降到最低。3)将MdRAD23D1在烟草(Nicotiana nudicaulis)中过表达,并对转基因烟草和野生型烟草进行干旱和高温处理,结果显示MdRAD23D1过表达可显著改善转基因材料对干旱和高温胁迫的耐受性。4周大小盆栽苗干旱处理2周后,与野生型株系相比,转基因株系萎蔫程度较轻,H2O2和O2-积累较少,与干旱胁迫相关的基因表达更活跃。高温处理2 d后,与野生型植株相比,转基因植株叶片黄化程度较轻,叶绿素含量较高,相对电导率较低。组织化学染色实验表明,转基因植株中活性氧积累较少。同时,转基因株系中,与高温胁迫相关的基因表达量更高。以上结果表明MdRAD2D1正调控植物响应干旱及高温胁迫。此外,本试验还构建了MdRAD23D1-RNAi干涉表达载体,利用农杆菌介导的遗传转化将其转入苹果组培材料‘GL-3’,并获得MdRAD23D1表达量降低的阳性转基因株系。
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