【摘 要】
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为了了解hetR基因及其产物在调控蓝细菌异形胞分化和格式形成过程中的分子机制, 该文通过首创的长链PCR定点突变法及抗性筛选替代法,分别克隆了编码第142位丝氨 酸、第152位
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为了了解hetR基因及其产物在调控蓝细菌异形胞分化和格式形成过程中的分子机制, 该文通过首创的长链PCR定点突变法及抗性筛选替代法,分别克隆了编码第142位丝氨 酸、第152位丝氨酸和第45位半胱氨酸的碱基被空变的hetR基因hetR(,SI52G)、hetR(,si52A)和hetR(,C45A);又用PCR方法从蓝细菌突变株216中克隆了第172位丝氨酸被突 变的hetR基因hetR(,C179N);在大肠杆菌中对四种突变的hetR基因实现了高效表达, 并对表达产物进行了分离纯化.对四种突变基因的表达产物HetR(,S142G)、HetR(,S152A)、HetR(,C45A)和HetR(,S179N)进行了体外研究.将三种突变的hetR基因hetR(,S142G)、hetR(,S152A)和het(,C45A)通过蓝细菌的三并交配法分别转化入无hetR基因背景的蓝细菌突变株DR884a,得到了三种关于hetR基因的蓝细菌变株S142G、S152A和C45A ;并对这三种蓝细菌突变株及216进行了研究,结果表明,S152A、C45A和216在没有化合态氮素存在的环境中均不能分化异形胞,而S142G则可形成异形胞;在减氮条件下通过观察四种突变蓝细菌的藻胆体荧光,也支持作者的上述结果.这说明:(1)HetR蛋白中的第152位丝氨酸残基是活性HetR蛋白最重要的氨基酸之一;(2)HetR蛋白中的第179位丝氨酸残基是保证HetR蛋白具有活性所必需的氨基酸;(3)HetR蛋白中的第45位半胱氨酸残基是HetR蛋白行使正常生理功能所必需的;(4)HetR蛋白中的第142位丝氨酸残 基在维持HetR蛋白具有分化异形胞的活性中,并具有特殊的功能
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