龙须菜配子体SSH文库的建立及与性别相关基因的分析

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江蓠属海藻龙须菜是我国重要的产琼胶物种,同时还是遗传学研究的良好材料。龙须菜已成为我国继海带和紫菜之后的第三大栽培海藻。因而对龙须菜的基础研究具有重要的理论和实践意义。   本文构建了龙须菜成熟雌雄配子体、未成熟雌雄配子体、四分孢子体之间的共10个正反向抑制性消减杂交(SSH)文库,分离世代和配子间的差异表达基因。正反向SSH文库中各选取384个克隆进行斑点杂交筛选。结果中我们得到了一条在雌配子体中特异表达的基因(暂命名为GMF-01)序列标签。并通过SMART-RACE技术分别克隆了龙须菜雌配子体GMF-01基因的cDNA全长。测序结果分析表明这一基因的cDNA开放阅读框全长1002bp,GC含量为47.7%,编码由333个氨基酸组成的多肽链。在NCBI网站上对这一序列进行比对,结果显示这一序列与已知的序列没有同源性。氨基酸序列分析表明这一序列演绎的蛋白等电点为7.92,蛋白质不稳定系数为43.61,可认为是不稳定蛋白。二级结构预测表明无规卷曲占45.05%,植物亚细胞定位分析结果显示这很可能是一种胞外分泌蛋白。它的功能和结构还有待进一步的研究和验证。本研究建立的抑制性消减杂交文库为更多差异基因的鉴定打下了基础,研究中获得的差异表达基因是与龙须菜配子发生过程密切相关的基因,研究这些基因的功能对江蓠属海藻性别决定机制的的认识具有重要意义,并会为红藻进化研究提供参考资料。
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