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研究背景血管生成与肿瘤生长和转移密切相关,与骨肉瘤患者的总生存期呈负相关。双功能蛋白脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)具有碱基切除和氧化还原功能,并参与肿瘤血管生成,然而其机制并不明确。我们的前期研究表明,转化生长因子(TGFP)在APE1缺失的骨肉瘤细胞中显著降低。转化生长因子β通过多种包括肿瘤抑制、血管生成、侵袭在内的多种途径促进肿瘤转移。在目前的研究中,我们首先揭示了 APE1、TGFβ以及微血管密度(MVD)在骨肉瘤组织标本中的两两相关性,同时,TGFβ、肿瘤大小以及微血管密度与研究对象的预后呈负相关。我们发现,在骨肉瘤细胞中敲低APE1导致TGFβ表达下降。此外,基于HUVECs的迁移及管状形成实验表明,APE1-siRNA抑制体外血管生成。培养基中TGFβ分泌型蛋白的减少也降低HUVECs中Smad3磷酸化水平。假如外源性的TGFβ纯化蛋白可以逆转降低的血管生成功能。在小鼠模型中,siRNA调控沉默的APE1下调了 TGFβ表达、肿瘤大小及微血管密度。综上所述,目前的证据提示,APE1在人骨肉瘤中通过调控依赖于TGFβ的通路调节血管生成,这对人骨肉瘤治疗提供了一个用于抗血管生成治疗的新靶点。研究目的1.揭示APE1、TGFβ、CD34在骨肉瘤组织中的表达情况及其与预后之间的关系以及APE1与TGFβ在人骨肉瘤中的相互作用关系2.明确APE1及TGFβ在人骨肉瘤血管生成中的作用研究方法1.收集80例病理学确诊的骨肉瘤患者的临床资料及组织样本2.免疫组化测定人骨肉瘤中APE1、TGFβ和微血管密度(MVD)的表达3.通过 APE1-siRNA 转染,WB,RT-PCR 测定 APE1、TGFβ 蛋白及 mRNA 水平表达情况,同时测定HUVEC细胞Smad3/pSmad3的蛋白表达情况4.通过酶联免疫实验(ELISA),迁移和管状形成实验测定APE1及TGFβ对血管生成能力的影响5.运用SPSS 20.0软件进行数据分析。计数资料用卡方检验或费希尔确切概率法。度量数据用t检验或Kruskal-Wallis检验。TGFβ阳性和阴性组间总生存用Kaplan-Meier生存检验比较。Spearman秩相关系数分析骨肉瘤组织MVD、APE1和TGFβ表达相关性。研究结果1.APE1高表达与TGFβ高表达与MVD高表达相关2.APE1、TGFβ及MVD高表达较APE1、TGFβ及MVD低表达的骨肉瘤患者中总生存期短3.APE1-siRNA降低TGFβ蛋白及mRNA水平表达,同时降低细胞培养上清中TGFβ的分泌4.较低浓度的TGFβ导致HUVECs中Smad3的磷酸化水平下降结论1.APE1、TGFβ和MVD的表达两两之间呈正相关2.APE1、TGFβ和MVD的表达与骨肉瘤患者的总生存期呈负相关3.TGFβ、肿瘤大小、MVD是骨肉瘤预后的重要预测因子,且预测效力递减4.人骨肉瘤中,APE1-siRNA可在蛋白和mRNA水平负向调控TGFβ表达5.APE1-siRNA通过TGFβ/Smad3信号通路抑制人骨肉瘤血管生成能力