家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori Bidensovirus，BmBDV)之前又称为家蚕浓核病毒Ⅱ型(Bombyx mori Densovirus typeⅡ，BmDNV-Ⅱ)。该病毒能使家蚕罹患浓核症，是首例动物二分DNA病毒。它主要感染家蚕中肠柱状上皮细胞，造成家蚕的浓核症。该病毒是直径为22nm左右的二十面体球形颗粒，拥有独立包装的双分子单链线性DNA(ssDNA)基因组，并且能够编码自身的DNA聚合酶。2012年国际病毒分类委员会(ICTV)专门为该病毒设立了二分DNA病毒科，二分浓核病毒属，并将其定为该属的代表种。BmBDV是目前已知唯一的编码DNA聚合酶的ssDNA病毒，DNA聚合酶的表达对该病毒的复制至关重要。而DNA聚合酶的相关研究，对于进一步的了解该病毒的复制机制具有重要意义。本研究主要是通过使用双荧光素酶报告系统利用共转染的方法，对该病毒DNA聚合酶启动子的活性区域以及病毒或者宿主中存在的蛋白对DNA聚合酶启动子活性的影响进行研究。　　 本实验主要对以下几个方面进行了研究:　　 (1)病毒DNA聚合酶启动子的克隆、活性鉴定及生物信息学分析。本研究中使用带有接头的引物，以病毒粒子作模板，扩增得到带有该启动子片段的萤火虫荧光素酶表达载体，并通过与内参质粒共转染的方法确定该病毒的DNA聚合酶启动子区域位于其转录起始位点上游286bp。此外，使用转录元件分析软件TESS进行分析，确定该片段中包含TATA box，SP1结合位点等启动子特征性序列。　　 (2)确定病毒的非结构蛋白(NS1、NS2)对DNA聚合酶启动子活性的影响。分别构建带有非结构蛋白NS1、NS2的瞬时表达载体，通过与构建的带有P97启动子的萤火虫荧光素酶载体及内参质粒共转染的方法，用化学发光检测仪检测共转染的蛋白的表达对启动子活性的影响。检测结果显示BmBDV非结构蛋白NS1、NS2均下调启动子活性分别达到14.3％和15.9％。　　 (3)确定病毒的结构蛋白VP对DNA聚合酶启动子活性的影响。通过构建带有VP的瞬时表达载体及共转染的方式，确定VP对该启动子活性的影响。检测结果显示VP蛋白的表达能够显著的增强该启动子的活性，使其活性升高了33.6％。　　 (4)确定宿主转录因子BmTWIST是否对该病毒DNA聚合酶启动子活性的影响。通过与上述相同的实验方法，将构建的BmTWIST瞬时表达质粒与PGL3-P97及内参质粒共转染，确定BmTWIST蛋白对P97启动子活性的影响。检测结果确定宿主家蚕BmTWIST蛋白的表达对DNA聚合酶启动子的活性没有影响。