乳腺癌是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。全球乳腺癌发病率自20世纪70年代开始逐年升高。尤其在发达国家，目前已上升至女性死亡原因的第一位。目前肿瘤的治疗手段包括手术、化疗、放疗、内分泌治疗、靶向治疗等。肿瘤的免疫治疗是通过激活人体免疫系统，依靠自身免疫机能杀灭癌细胞，是继手术、化疗和放疗后的一种新的肿瘤治疗手段，也是治疗乳腺癌尤其是三阴乳腺癌一个极具前景的辅助策略。　　iNKT细胞是一类既表达T细胞受体又表达NK细胞表面标志的一组异质性淋巴细胞亚群，在先天固有性免疫和后天适应性免疫中均发挥重要作用。α-半乳糖神经酰胺，是一种强有效的iNKT细胞激活剂，通过CD1d分子提呈和TCR介导的方式激活iNKT细胞，从而刺激iNKT细胞的大量增殖活化。活化的iNKT细胞，既可直接作为抗肿瘤效应细胞发挥杀伤作用，又能通过激活其他免疫效应细胞，间接实现抗肿瘤作用。iNKT细胞疗法是一种新的肿瘤免疫治疗方法。　　目的:　　本研究拟对人脐带血来源iNKT细胞体外培养进行优化，探索高效的体外制备iNKT细胞的方法。观察GM-CSF联合α-GalCer和IL-2体外制备人脐带血来源iNKT细胞的优势，并观察其对不同亚型乳腺癌细胞体外的杀伤效果。　　方法:　　采用加入GM-CSF联合α-GalCer和IL-2的方法体外制备iNKT细胞，与常规方法（加入α-GalCer和IL-2）进行对比，用只加IL-2作为对照，观察制备的单个核细胞的增殖情况，采用流式细胞仪检测单个核细胞中iNKT细胞、NK细胞、T细胞所占的比例，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中细胞因子IL-4和IFN-γ的浓度，采用CCK-8法检测对不同亚型乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、MCF-7及AU-565）的杀伤效果。　　结果:　　人脐带血单个核细胞增殖情况:倒置显微镜下观察，3组细胞在第3天左右开始增殖，第7～14天保持较快的增殖速度。统计分析表明，两实验组比对照组增殖速度较高，但无统计学差异。　　单个核细胞中iNKT细胞、NK细胞、T细胞所占比例:第0天，人脐带血单个核细胞中iNKT细胞所占比率较低，仅加入IL-2后并不能增加iNKT细胞的比率。而两个实验组加入α-GalCer及不同细胞因子后均能使iNKT细胞扩增。第7天时，两个实验组中iNKT细胞所占比例差异无统计学意义，而第14天时，GM-CSF+α-GalCer+IL-2组的iNKT细胞所占比例明显增高，与其他组对比差异有统计学意义(p＜0.05)。本培养方法中NK细胞(CD3-CD161+)所占比率，第7天和第14天时，两个实验组均低于对照组且差异有统计学意义(p＜0.01)，而两个实验组比较，差异无统计学意义。在本研究的培养方法中T细胞(CD3+)所占比率，第7天和第14天时，两个实验组与对照组比较，差异均无统计学意义，两个实验组比较，差异也无统计学意义。　　培养上清液中IL-4、IFN-γ的浓度:第1天时，三组IL-4的浓度均较低，而IFN-γ的浓度两个实验组稍高于对照组，但差异均无统计学意义。第7天时，IL-4的浓度实验组均高于对照组，且差异有统计学意义(p＜0.01)，而两个实验组对比差异无统计学意义; IFN-γ的浓度实验组均高于对照组，但差异无统计学意义。第14天时，IL-4的浓度实验组均高于对照组，且差异有统计学意义(p＜0.05)，而两个实验组对比差异无统计学意义; IFN-γ的浓度，实验组均高于对照组，且差异有统计学意义(p＜0.05)，两个实验组对比，GM-CSF+α-GalCer+IL-2组明显高于α-GalCer+IL-2组，且差异有统计学意义(p＜0.05)。　　CCK-8法检测各组培养细胞对不同亚型乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、MCF-7及AU-565）的杀伤作用:两个实验组对三种亚型乳腺癌细胞均产生显著的杀伤效果，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。GM-CSF+α-GalCer+IL-2组与α-GalCer+IL-2组相比，杀伤效果差异不显著。而对三种乳腺癌细胞株杀伤效果之间比较，差异无统计学意义。　　结论:　　以α-GalCer为核心的两种方法均可体外扩增脐带血来源的iNKT细胞，iNKT细胞活化后可以分泌IL-4及IFN-γ，以IFN-γ为主。两组中，GM-CSF联合α-GalCer和IL-2体外制备的iNKT细胞增殖能力较强，且能诱导更多的IFN-γ的分泌。是一种优化的更好的iNKT细胞制备方法。iNKT细胞对不同亚型乳腺癌细胞均有显著的杀伤效果，有望成为一种有效的乳腺癌治疗手段。