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目的:构建HPV16E6过表达腺病毒载体,比较HPV16E6过表达组和空白载体组两组与空白对照组Me180细胞侵袭与迁移能力的大小,以及E-cadherin m RNA、蛋白的表达及其启动子甲基化的状态,探究HPV16E6对宫颈癌Me180细胞侵袭与迁移能力的影响及其机制。方法:1.构建HPV16E6腺病毒:将HPV16E6基因亚克隆至腺病毒穿梭质粒p HBAd-MCMV-GFP,用Eco R I和Bam H I双酶切判定、运用PCR技术扩增并将其产物与p HBAd-MCMV-GFP结合并转化大肠杆菌,检测序列是否正确,然后取HPV16E6过表达腺病毒载体质粒及骨架质粒,用Lipofiter TM转染试剂介导将重组体腺病毒在293A细胞中的包装扩增纯化;2.病毒转染效果验证:将过表达HPV16E6腺病毒转染的宫颈癌Me180细胞,空白腺病毒转染的宫颈癌Me180细胞,以及未进行腺病毒转染的宫颈癌Me180细胞分成3组:HPV16E6过表达组、空白载体组以及空白对照组,用过表达HPV16E6基因的腺病毒及其空白腺病毒载体感染Me180细胞,36小时后观察绿色荧光表达情况,观察荧光效果并运用Western-Blot实验检测3组细胞中HPV16E6的表达来验证其转染效果;3.细胞迁移与侵袭能力:运用Traswell迁移与侵袭实验检测过表达HPV16E6基因对宫颈癌Me180细胞系迁移与侵袭能力的影响;4.机制研究:运用RT-q PCR实验及Western-Blot实验检测3组细胞中E-cadherin m RNA及其蛋白的表达,分析HPV16E6基因对Me180细胞迁移与侵袭能力影响的机制,并进一步运用甲基化特异性PCR检测三组细胞E-cadherin甲基化状态进行验证。结果:1.通过琼脂糖凝胶电泳试验、测序结果证实了携带HPV16E6序列穿梭载体构建成功,荧光显微镜图片及Western blot结果显示过表达HPV16E6的腺病毒已成功转染至宫颈癌Me180细胞中,转染效率高(80%-90%);2.Transwell迁移与侵袭实验中,过表达HPV16E6腺病毒转染宫颈癌Me180细胞后,同空白对照组相比较其细胞的迁移与侵袭能力显著增强(P<0.05),而空白载体组相对空白对照组,其细胞的侵袭与迁移能力无明显改变(P>0.05);3.RT-q PCR及Western-Blot实验中,过表达HPV16E6组同空白对照组相比较,其E-cadherin m RNA及其蛋白的表达呈显著下降(P<0.05),而空白载体组的与空白对照组相比较,其E-cadherin m RNA及其蛋白表达水平无明显变化(P>0.05);4.甲基化特异性PCR显示,过表达HPV16E6组的细胞E-cadherin启动子区呈完全甲基化状态,其甲基化程度明显高于空白对照组(P<0.05),而空白载体组甲基化程度与空白对照组相比较,无明显差异性(P>0.05)。结论:1..HPV16E6基因可能通过下调宫颈癌细胞系Me180中E-cadherin的表达水平增强宫颈癌细胞系Me180细胞迁移与侵袭能力,进而促进癌细胞的侵袭与转移;2.表观遗传学方面,HPV16E6基因可通过上调E-cadherin启动子区甲基化水平从而抑制E-cadherin蛋白表达,可能是逆转宫颈癌侵袭与转移的潜在关键点。