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本研究运用细胞培养、流式细胞分析、Western blotting、RNA干扰等细胞分子生物学技术和方法,以Raji细胞系及小鼠脾B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞为实验对象,研究了多细胞因子在调控hsBAFF依赖的B细胞增殖和存活中的作用,解析了Erk1/2和S6K1信号通路在多细胞因子增强hsBAFF促进B细胞增殖与存活中的重要性及意义；最后,初步探讨了hsBAFF对小鼠脾B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞的促增殖作用以及相互关系。具体结果如下：1多细胞因子调节hsBAFF依赖的B细胞增殖和存活用不同浓度的hsBAFF (0-0.25 μg/ml)刺激Raji细胞48 h、或用0-100 ng/ml IL-2、IL-4、IFN-γ或TNF-α分别刺激Raji细胞48 h、或用IL-2(10和50 ng/ml)、IL-4(5和25ng/ml)、IFN-γ(10和100 ng/ml), TNF-α(10和50 ng/ml)分别和0.25 μg/ml hsBAFF联合共刺激Raji细胞48 h。然后,MTS和细胞计数分析以及细胞台盼蓝活性计数和细胞流式分析。结果显示,hsBAFF剂量依赖地促进B细胞增殖与存活；IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α也分别呈浓度依赖性地促进B细胞增殖与存活；IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α分别提高hsBAFF促进B细胞的增殖与存活。提示：合适的IL-2、IL-4、IFN-γ或TNF-α增强hsBAFF依赖的B细胞增殖与存活。2多细胞因子增强hsBAFF激活Erkl/2和S6K1通路促进B细胞增殖和存活小鼠脾脏B淋巴细胞和/或Raji细胞用0-0.25 μg/ml hsBAFF处理12h,或用0.25μg/ml hsBAFF处理0-24 h,或用IL-2(10和50ng/ml)、IL-4(5和25 ng/ml)、 IFN-γ (10和100 ng/ml), TNF-α (10和50 ng/ml)单独或与hsBAFF (0.25 μg/ml)联合处理12h或48 h,或用50 ng/ml IL-2、25 ng/ml IL-4、100 ng/ml IFN-γ、50 ng/ml TNF-α分别单一或多重联合0.25 μg/ml hsBAFF处理12h或48 h；细胞也分别用5 μM U0126预处理1h或用0.2 μg/ml雷帕霉素预处理2 h,然后用IL-2、IL-4、 IFN-γ、TNF-α分别单一或多重联合hsBAFF处理12h或48 h。此外,在shRNA Erk1/2、shRNA S6K1和shRNA GFP分别感染Raji细胞后用IL-2、IL-4、IFN-γ、 TNF-a分别单一或多重联合hsBAFF处理12 h或48 h。然后,MTS分析细胞增殖表现、台盼蓝计数活的细胞数量,Western blot分析Erk1/2、S6K1和S6蛋白表达变化。结果显示：IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α单独或多重联合hsBAFF通过增强Erk1/2和S6K1/S6磷酸化表达更加有力地促进B细胞增殖与存活：应用U0126抑制或shRNA干扰下调Erkl/2表达明显阻滞IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α单独或多重联合hsBAFF促进的Erkl/2磷酸化以及B细胞增殖与存活；应用雷帕霉素抑制或shRNA干扰下调S6K1表达也显著降低IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α单独或多重联合hsBAFF促进的S6K/S6的磷酸化及B细胞增殖和存活。提示：单一或多重IL-2、IL-4、IFN-γ和/或TNF-α增强hsBAFF激活Erkl/2和S6K1通路促进B细胞增殖和存活。3 hsBAFF刺激小鼠脾脏B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞增殖及其相互关系小鼠脾B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞分别用4 μg/mL LPS或20μg/mL PHA或联合0.25 μg/ml hsBAFF处理48 h：或混合的小鼠脾B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞用4 μg/mL LPS或20 μg/mL PHA联合0.25μg/ml hsBAFF处理48 h；或收集0.25 μg/ml hsBAFF刺激的小鼠脾B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞培养液分别与用4μg/mL LPS处理的小鼠脾B细胞混合培养48 h。MTS分析细胞增殖和淋巴细胞转化刺激指数。结果显示：hsBAFF能有效地促进小鼠脾B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞增殖以及小鼠脾B淋巴细胞转化率(刺激指数),同时hsBAFF刺激的CD4~+T淋巴细胞培养液具有显著增强hsBAFF促进B淋巴细胞增殖作用。提示：hsBAFF刺激B淋巴细胞和CD4~+T淋巴细胞增殖；hsBAFF可通过由hsBAFF活化的CD4~+T淋巴细胞促进B淋巴细胞增殖。