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禽白血病（Avian Leukosis,AL）是由反转录病毒科甲型反转录病毒属禽反转录病毒（AvianLeukosis Virus,ALV）引起的一种禽类多种肿瘤性疾病的统称。本病呈世界性分布,感染率高,能引起鸡的死亡、消瘦,降低鸡群的生产能力,是严重危害养禽业发展的主要疾病之一。本病历史悠久又不断出现新型病例,如,J亚群禽白血病病毒（Avian leukosis virus Subgroup J,ALV-J）,是20世纪80年代末在英国发现并鉴定的一个新的禽白血病病毒亚群,对肉鸡业造成了巨大的危害,在我国一些地区也有本病发病的报道。目前,对禽白血病尚无有效的药物治疗,也没有疫苗可以进行预防,世界各国主要通过病原检测,淘汰阳性鸡,净化种群等防制措施来控制本病。p27蛋白是ALV核心衣壳蛋白的主要成分,是一种高度保守的非糖基化蛋白,有许多病毒抗原位点,是制备检测抗体的首选抗原。本研究目的是将含有p27重组质粒转化的BL21菌进行培养,并进行原核表达条件优化。结果表明,最适表达条件为:37℃振荡培养至OD600为0.6;加入IPTG浓度至1mmol/L,30℃振荡（200rpm）培养,诱导表达3h。诱导表达产物经SDS-PAGE检测,在43KD处出现目的蛋白,光密度扫描分析重组蛋白占菌体总蛋白的19.83%。经Western-blot检测,表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。对目的蛋白大量诱导表达,用Ni-NTA纯化树脂对表达的蛋白进行纯化,收集不同咪唑浓度缓冲液的洗脱液,经SDS-PAGE检测,在GuNTA-60 Buffer和GuNTA-100 Buffer洗脱液中有目的蛋白存在。以纯化的p27蛋白为抗原免疫BALB/c纯系小鼠,100μg/只,共免疫4次。采血,建立间接ELISA方法测定血清抗体效价。取血清效价高的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG1500的作用下进行细胞融合。用HAT选择培养基对杂交瘤细胞进行培养,当杂交瘤细胞集落布满孔底1/2时,取上消作抗体活性检测。采用有限稀释法对阳生孔进行亚克隆,重复3次,得到两株单克隆细胞株:2E8、3C6。及时冻存得到的单克隆细胞株,并进行腹水制备,测定腹水效价在1:6400以上。采用硫酸铵沉淀法对单抗进行纯化,用紫外分光光度仪测定两株纯化后的单抗蛋白含量,根据公式计算蛋白质浓度分别为4.3 mg/ml和4.6 mg/ml。经SDS-PAGE和Western-blot检测,所得单抗且有良好的特异性。本研究的完成为今后制作抗p27单抗试剂盒商品化的研发,快速、准确诊断ALV以及分子流行病学调查研究奠定了基础。