研究背景：肾癌是常见的泌尿系肿瘤，早期肾癌没有典型的症状和表现，临床上缺乏早期诊断预测和判断预后的标志物，而复发性及晚期转移性肾癌的治疗效果差，手术以外的放化疗等辅助治疗效果不明显。目前临床上需要一种新的生物学标志物，能够对肾脏肿瘤进行早期诊断和预后判断，并有可能作为肿瘤治疗的新靶点，提高肾癌，特别是晚期肾癌的治疗效果，延长生存期，使患者受益。研究目的：本课题拟通过对miR-218在肾癌肿瘤中的特异表达，以及对肾癌细胞调控作用的研究，明确miR-218在肾脏肿瘤中的作用机制，为肾癌的诊治提供新的思路。方法：1.收集肾癌标本，利用实时定量PCR技术对新鲜肾癌组织及癌旁组织的miR-218表达量进行验证，以明确miR-218在肾癌组织的表达情况。2.应用pcDNA3.1(+)载体，以人Has-miR-218设计引物，PCR法进行扩增，再与载体相连接，构建稳定表达质粒，并在肾癌细胞株中验证其效果。3.使用前期合成的质粒，在体外研究中选择合适肾癌细胞株，进行转染，调控在肾癌细胞株中miR-218的表达水平，研究miR-218对肾癌细胞生物学功能的影响，如增殖、侵袭、凋亡能力的改变等情况。4.采用生物信息学方法对靶向基因进行预测，筛选出候选靶向基因，利用设计的引物将目的基因连接入荧光报告载体，转染至肾癌细胞株内，测定细胞裂解后的荧光表达量，并使用Western blot方法测定蛋白水平的表达变化，验证miR-218对靶向基因的调控作用，进一步明确调控的通路。5.在动物体内验证，miR-218通过RAB6C对肾细胞癌的调控作用，以及上调miR-218的表达水平对肾癌肿瘤的抑制作用。结果：1．采用PCR方法对肾癌及癌旁组织标本的miR-218的表达量进行检测，发现在肾癌组织中，miR-218的表达水平较正常组织呈现明显的低表达，这提示了miR-218在肾细胞癌中可能是一种抑癌基因；2.成功构建了miR-218表达质粒pcDNA3.1-miR-218，鉴定检测符合设计要求，该载体可以应用于miR-218功能及作用机制的研究；3.应用miR-218表达载体，转染至肾癌细胞株中，上调细胞株中miR-218的表达水平，使用一系列标准体外肿瘤实验进行检测，发现上调miR-218的表达水平能够明显抑制肾癌肿瘤细胞的生长，减弱其增殖和侵袭能力，增强细胞的凋亡水平；4.生物信息学预测miR-218的靶向基因之一是RAB6C，通过荧光素检测验证RAB6C确实是miR-218的靶向调控因子，Western blot结果提示，转染miR-218的肿瘤细胞中RAB6C的表达明显降低，说明miR-218通过RAB6C进行调控，抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，促进其凋亡；5.动物体内实验证实，上调miR-218的表达水平，RAB6C表达水平降低，可以抑制肾癌肿瘤的生长。结论：通过上述实验，我们首次获知，miR-218对肾癌细胞的生长、增殖、侵袭和凋亡具有调控作用，其调控作用通过调控RAB6C来实现。上调miR-218的表达，在体内体外，均可以抑制肾癌肿瘤的生长，为肾癌的肿瘤生物学治疗提供了新的途径。