目的:环介导等温扩增（LAMP）是日本科研人员在2000年发现并创立的一种核酸扩增技术。LAMP需要4～6个引物,在60℃～65℃恒温条件下,经过30～60min后,可将少量核酸扩增至千百万份。虽然目前检验病原体核酸的方式有很多,比如PCR,q PR,NGS,适配子等,但是LAMP仍因为其所需设备简单易得而脱颖而出。但是LAMP有一个缺点:假阳性率高。这是因为环境污染和引物二聚引起的非特异性扩增。这一缺点也限制了LAMP的大规模应用。LAMP目前常用的检测方法均不能排除LAMP的假阳性结果。因此我们设计了两种LAMP检测方法用来排除假阳性结果。方法:这两种方法都是利用LAMP产物中的单链环状结构设计互补探针。第一种利用磁珠和SYBR GREENⅠ检测,需要一段互补探针,探针一端修饰生物素,与链霉亲和素磁珠相连形成磁珠探针,磁珠探针识别LAMP产物后,通过SYBR GREENⅠ观察实验结果,肉眼观察即可确定是否存在目标序列。第二种方法利用拉曼光谱间接法检测LAMP产物,根据LAMP产物中的单链环状结构设计两段探针,其中一段探针与荧光法一样连接磁珠形成磁珠探针,另一段探针一端双硫键修饰,与修饰了信号分子4-MBA的银纳米粒子相连,形成信号探针。磁珠探针负责富集与分离,信号探针提供拉曼信号,探针分别与LAMP产物孵育后,通过信号分子4-MBA的拉曼光谱强度来确定目标序列存在与否。为了实现这两种设计我们进行了以下工作。第一步,首先我们收集了几种医院、海关比较关注的病毒的资料。设计引物,选取各项数值比较好的引物,进行LAMP,用琼脂糖凝胶电泳检查LAMP结果。并对60℃～65℃中最适合温度进行探索。第二步,开始构建磁珠荧光法检测LAMP产物,以巨细胞病毒为例设计磁珠探针并确定了基本的检测方法,最后用凝胶成像仪观察结果。又用该法检测了其余六种病毒。最后优化整个检测过程的时长。第三步,以CMV为例构建SERS联合LAMP检测病原体核酸,设计并制备了银纳米探针,并用透射电镜表征探针结构,利用上一步优化的实验方法孵育磁珠探针、LAMP产物、银纳米探针,最后检测拉曼信号并通过透射电镜观察磁珠探针、LAMP产物、银纳米探针形成的三明治夹心结构。结果:第一步得到结果为设计的引物都能成功进行LAMP。并且60℃～65℃间温度变化对电泳结果无影响。第二步通过磁珠加SYBR GREENⅠ的方法成功检测到了CMV病毒以及其他六种病毒。并且缩短了LAMP过程的时间和孵育时间。使整个过程用时缩短一半,控制整个检测过程在2个小时以内。第三步透射电镜结果表明探针成功合成,并在透射电镜上看到了磁珠探针和银纳米探针通过LAMP产物紧密的结合在一起。成功检测到了LAMP产物上结合的信号分子的拉曼信号。结论:通过以上工作证明,我们所设计的两种方法可以有效排除LAMP的假阳性结果,并可以应用于多种已知核酸序列的病毒。这两种方法提高了LAMP的准确率,可应用于各种基层医疗机构和多种环境下的现场检测,使核酸检测普及至更多基层机构和偏远地区,使更多人实现就近检测,快速得到结果,该法对核酸检测的可及医疗有着重大意义。