壳聚糖分解细菌的分离鉴定以及壳聚糖分解液对黄瓜枯萎病的防治

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1.壳聚糖对植物病害防治的生物活性的研究将壳聚糖配成不同浓度的溶液,选取6种供试植物病原真菌Fusarium.sp、Fusarium.acuminatum、Fusarium.oxysporum、Fusarium.semitectum、Alternaria.solani、Alternaria.cucumerina,发现离体条件下0.2%的壳聚糖溶液对植物病原真菌的抑制效果最好。用不同浓度的壳聚糖溶液浸种后发现,浸种时间在1h内时,5%壳聚糖10倍液浸种后,种子萌发率要好于其他浓度的处理及对照。用5%壳聚糖10倍液浸种、沾根处理后,对黄瓜幼苗接种枯萎病病原菌,与对照组相比较,在发病前期壳聚糖处理组植株体内几丁质酶活性会有所降低,壳聚糖处理后的植株发病率要低于对照,其中沾根处理发病率为50%、浸种发病率为82%、对照组发病率为94%。2.壳聚糖分解细菌的分离、筛选本试验从甘肃各地采集166份土样,用壳聚糖培养基对土样中的微生物进行筛选,从中筛选出2株能够在壳聚糖培养基上生长的细菌SQ-2-H、H-5-B。通过实验表明:在NA培养基中SQ-2-H、H-5-B对数生长期在20—32h之内,在壳聚糖培养基中,两种筛选菌的最适pH在6.1—6.6之间;SQ-2-H在最适pH值下的对数生长期基本在40—70h之内,H-5-B在最适pH值下的对数生长期基本在60—72h之内。采用Schales法检测不同培养时间两种筛选菌水解壳聚糖时酶活性的变化发现:SQ-2-H在最适pH值下培养50h左右酶活性最大,H-5-B在最适pH值下培养70h左右酶活性达到最大值。3.筛选菌SQ-2-H、H-5-B的初步鉴定SQ-2-H和H-5-B菌株的16S rDNA序列分析结果表明,它们分别与GenBank中已报道的Chryseobacterium sp.RHA2-18和Bacillus cereus 1Re107 16S rDNA序列有98%和96%的相似性,由系统树可见SQ-2-H与H-5-B的亲缘关系远,革兰氏染色结果表明,SQ-2-H为革兰氏阴性杆状菌,H-5-B为革兰氏阳性杆状菌。4.细菌SQ-2-H、H-5-B壳聚糖培养液对黄瓜枯萎病防治作用的初步研究将筛选菌SQ-2-H、H-5-B在含速效N((NH)2SO4)和无速效N的壳聚糖培养基中分别连续培养192h,采用牛津杯抑菌圈法,每24h取培养液测定抑菌效果,由抑菌圈直径大小可知:SQ-2-H在含速效N((NH)2SO4)壳聚糖培养基中培养后各个时期的培养液抑菌效果要高于不含速效N((NH)2SO4)的处理;同样,H-5-B也得到相同的结果。通过筛选菌SQ-2-H、H-5-B对黄瓜枯萎病的防治实验发现:用SQ-2-H含速效N((NH)2SO4)壳聚糖分解液沾根处理后,对黄瓜枯萎病的防治效果最好。
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