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背景与目的Survivin是目前已知作用最强的凋亡抑制蛋白,对细胞凋亡和细胞分裂周期有双重调控作用,通过特异性地抑制凋亡信号转导过程中最下游的效应分子caspase-3的活性而阻断凋亡的发生过程。Survivin过度表达,使细胞失去了正常增殖周期中凋亡“开关”(Check point)的限制,造成细胞增殖增加,凋亡减少,细胞增殖与凋亡平衡被打破,导致癌症的发生和发展。p27kip1蛋白是一种广谱周期素依赖激酶抑制剂,可抑制多种周期素和CDK复合物的活性,阻止细胞由G1期向S期转换,使细胞停滞于G1期,并具有促进细胞分化、凋亡的作用。p27kip1表达下降与多种肿瘤的发生、发展及预后有关,而且参与介导肿瘤粘附性、耐药性的调节。研究表明：p27kip1表达降低与乳腺癌、胃癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌浸润增加及不良预后有关。p27kip1(?)氐表达时,失去对肿瘤细胞的抑制作用使得肿瘤得以生长和浸润转移。细胞周期调控是当前研究的热点,细胞周期有两个调定点：G1/S和G2/M。p27kip1作为细胞周期负调控因子,具有阻止细胞通过G1/S期转化关卡的作用,Survivin属于正调控因子,能够对抗G2/M期细胞凋亡的诱导作用,他们可能通过调节凋亡从而在肿瘤的形成及发展过程中发挥重要作用。目前,survivin和p27kip1在肝癌的发生过程中的作用尚未完全明确,关于survivin和p27kip1与肝癌关系的研究报道不多。本课题研究旨在通过检测HCC组织中survivin和p27kip1的表达情况及细胞凋亡情况,分析survivin和p27kip1的表达与肝癌细胞凋亡间的相互关系,并探讨其临床病理学意义。材料和方法1标本本研究收集郑州大学第二附属医院2006年12月至2009年06月手术切除,临床与病理学资料完整的肝癌患者肝组织标本40例(包括肝癌组织和癌旁组织),其中男35例,女5例,年龄30～75岁,平均60.2岁；所有患者术前均未接受任何化、放疗及其他治疗。13例有血管癌栓(包括肉眼及镜下癌栓),21例有完整包膜,19例包膜不完整或无包膜；小肝癌(≤5 cm)18例,大肝癌(>5cm)22例；术前甲胎蛋白阳性(>20μg/L)29例,阴性11例；HCC的Edmondson分级标准：Ⅰ级及Ⅱ级15例,Ⅲ级及Ⅳ级25例。癌旁组织取材为距癌结节边缘2cm以外肝组织,避开坏死区。40例正常肝组织取自肝血管瘤患者,镜下诊断全部为正常肝脏组织。2研究方法分别用免疫组织化学链霉卵白素-生物素-辣根过氧化物酶复合物(streptavidin peroxidase conjugated method, SP)法检测Survivin、p27kip1蛋白表达；TUNEL法检测细胞凋亡情况。3结果判定标准Survivin和p27kip1阳性判断标准：Survivin以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞,p27kip1以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞,凡染色强度明显高于背景且肿瘤阳性细胞数>5%为阳性表达,染色强度与背景无明显差别且肿瘤阳性细胞数≤5%为阴性。随机选择10个高倍视野(10×40)计数阳性细胞数,求其平均值。凋亡细胞判断标准：光镜下观察TUNEL染色切片的显色反应,结合形态学改变确定凋亡细胞。凋亡细胞阳性着色呈棕褐色,部分可见凋亡小体,凋亡水平以凋亡指数来评价,平均计算1000个肿瘤细胞中含阳性细胞个数作为凋亡指数(apopotic index, AI)。在癌细胞聚集区随机选取10个高倍镜视野计算癌细胞凋亡指数,求其平均值。4统计学方法应用SPSS 11.0统计学分析软件包对所得数据进行统计处理,计量资料表示以均数±标准差(X±s)表示,采用SPSS软件11.0行x2检验、配对卡方检验,检验水准a=0.05。结果1、癌旁组织及正常肝组织均未见Survivin蛋白表达,肝癌组织中Survivin蛋白表达(85%,34/40)明显高于癌旁组织(0%,P<0.05)及正常肝组织(0%,P<0.05)；2、肝癌组织中p27kip1蛋白表达(20%,8/40)明显低于癌旁组织(75%,30/40,P<0.05)及正常肝组织(80%,32/40,P<0.05),癌旁组织及正常肝组织中p27kip1蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)；3、Survivn、p27kip1蛋白表达与患者的性别、年龄、AFP无关(P>0.05),而与肿块直径、肝内转移、是否有门脉癌栓等临床病理学指标有关(P<0.05)；Survivin蛋白表达与患者的Edmondson分级有关(P<0.05),p27kip1蛋白表达与患者的Edmondson分级无关(P>0.05)；4、40例肝癌组织的平均AI为(1.654±0.356)%,癌旁组织的平均AI为(3.758±0.254)%,正常肝组织的平均AI为(4.236±0.529)%,其中34例Survivin表达阳性组织的AI为(1.562±0.496)%,6例Survivin表达阴性组织AI为(4.082±0.830)%,两者比较,差异有显著意义(P<0.05)；8例p27kip1表达阳性组织的AI为(3.552±0.326)%,32例p27kipl表达阴性组织AI(0.802±0.549)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)；5、Survivin蛋白表达与P27kip1蛋白的表达在肝癌组织中呈明显的负相关(r=-0.758,P<0.05)。结论1、Survivin在HCC呈高表达和p27kip1在HCC呈低表达,Survivin蛋白与p27kip1蛋白在肝癌组织中的表达呈负相关,提示其与HCC的发生、发展密切相关。2、Survivin、p27kip1蛋白表达与患者的性别、年龄、AFP无关,而与患者的肿块直径、是否肝内转移、是否有门脉癌栓等临床病理学指标有关；Survivin蛋白表达与患者的Edmondson分级有关,p27kipl蛋白表达与患者的Edmondson分级无关。3、Survivin和p27kip1蛋白可能通过抑制细胞凋亡而影响肝癌的生物学特征。