贲门腺癌microRNA表达谱的筛查与验证

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目的:筛查并验证出贲门腺癌表达的microRNA表达谱,为贲门腺癌的发病机制研究、早期预警、新的治疗方法及靶向药物研发提供理论依据。方法:从2011年12月开始建立肿瘤科的贲门癌肿瘤组织和癌旁正常组织的组织标本库备用。所有试验标本均由实验员携带便携式液氮罐至手术室收集,贲门腺癌肿瘤经外科医师切除后,于30分钟内自手术标本上切除足够的癌组织、癌旁组织和正常组织,随即编号放入便携式液氮罐冷冻,后快速转入肿瘤科-80℃超低温冰箱中组织标本库长期保存备用。第一步根据之前签订的协议,在贲门癌肿瘤组织标本库中随机选取20例病人的贲门腺癌肿瘤组织及其对应的癌旁正常组织,送至上海康成生物工程有限公司,使用Exiqon公司16.0版本的LNATMmicroRNA芯片(涵盖1000个已知的microRNAs)对贲门腺癌肿瘤组织及癌旁正常组织进行了检测,初步筛查出在贲门癌肿瘤组织和癌旁组织中呈差异性表达的microRNA。第二步根据microRNA芯片的扫描结果,扩大样本量,设计引物,应用ABI7500实时荧光定量PCR仪对筛查出的呈显著差异表达的microRNA在30对贲门腺癌肿瘤组织和癌旁正常组织中的差异表达情况的进行扩增、分析、验证。microRNA芯片的筛查结果由上海康成生物工程有限公司负责分析和处理。qRT-PCR的验证结果采用均数±标准差的格式表示,使用SPSS17.0统计软件包进行配对t检验分析和Wilcoxon符号秩和检验分析;检验水准设定在α=0.05水平。结果:microRNA芯片的筛查结果发现发现在贲门腺癌肿瘤组织和癌旁正常组织中共存在209种microRNA的差异表达,其中的microRNA-645等50个microRNA在癌和癌旁组织中呈显著差异表达。扩大样本量,设计引物对这50种在贲门腺癌癌和癌旁组织中呈显著差异表达的microRNA进行PCR扩增验证,结果发现microRNA-20b、microRNA-195、microRNA-337、microRNA-338、microRNA-433、microRNA-10a和microRNA-645等16种microRNA在贲门腺癌的肿瘤组织和癌旁组织中的表达差异仍有统计学意义(P <0.05),可以验证出与microRNA芯片筛查预测结果一致的在癌组织中的上调或下调趋势;而其余34种microRNA在两者之间的表达差异无统计学意义(P>0.05),无法验证出与microRNA芯片筛查预测结果一致的在癌组织中的上调或下调趋势。结论:贲门癌的microRNA表达谱包括microRNA-20b、microRNA-195、microRNA-337、 microRNA-338、 microRNA-433、 microRNA-10a、 microRNA-645、 microRNA-345-5p、 microRNA-45、 microRNA-256、 microRNA-72、microRNA-64、microRNA-27a、microRNA-100、microRNA-109和microRNA107等16种microRNA。
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