目的：观察人参皂甙Rb1（GRb1）对马桑内酯（CL）所致大鼠癫痫的作用，建立大鼠海马组织蛋白质分离的双向电泳（2-DE）技术体系，获得可能与CL癫痫发作及GRb1神经保护作用有关的蛋白质成分，探讨海马组织蛋白质在癫痫发生发展过程中的作用和地位以及GRb1对其的影响。 方法：选取雄性成年SD大鼠18只，随机均分为3组：对照组、CL致痫组和GRbl+CL致痫组。GRbl+CL致痫组大鼠用GRb1（1．5mg/ml，30mg/kg）每天灌胃1次，连续3天，第4天腹腔注射CL（1mg/ml，4mg/kg），观察其行为学改变。自腹腔注射CL后开始计时，3小时后行大鼠脑组织取材。CL致痫组除实验前3天用等量生理盐水灌胃外，余处理同GRb1+CL致痫组。对照组除实验日腹腔注射等量生理盐水外，余处理同CL致痫组。各组取半数动物，用2%戊巴比妥钠麻醉后，开胸暴露心脏，经左心室用150ml-200ml的生理盐水快速灌注冲洗，继以400 ml4%多聚甲醛灌注固定，随后开颅取脑组织置于4%多聚甲醛中后固定过夜，常规脱水、透明、浸蜡、包埋。石蜡切片常规脱蜡，HE染色，普通光学显微镜下观察海马神经元的组织学改变。各组其余半数动物，断头处死并剥离其海马组织，-80℃保存备用。海马组织采用常规的组织裂解法冰上裂解，提取海马组织蛋白，Bradford法测定蛋白质含量，双向电泳分离蛋白质。第一向采用pH4-7的固相pH梯度（IPG）等电聚焦，第二向采用浓度为10%的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），获得的凝胶进行银染并经凝胶成像系统采集获得双向电泳图谱，根据IPG胶条的等电点（pI）线性梯度和标准分子量Marker，确定蛋白质斑点的pI和分子量（MW），用Image Master2DE Platinum5．0图像分析软件进行蛋白质电泳图谱差异分析，以GRb1+CL致痫组凝胶作为参考胶分别与对照组和CL致痫组凝胶进行蛋白斑点匹配，分别在CL致痫组和GRb1+CL致痫组初步筛选出相对灰度值变化较大的蛋白质斑点共6个。切取蛋白质斑点，应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）进行检测，获得各蛋白质的肽指纹图谱，结合2-DE图谱中各蛋白质斑点的pI和MW值，利用Mascot软件进行匹配Genbank数据库进行检索，鉴定大鼠海马组织差异表达的蛋白质，探讨GRb1对CL致痫大鼠海马神经元蛋白质组的影响。 结果：①大鼠的行为学表现，参照Dieh1的癫痫分级标准，对照组大鼠均未见癫痫发作；CL致痫组大鼠6例均出现Ⅲ-Ⅴ级发作，平均可达Ⅳ级。GRb1+CL致痫组大鼠4例未见明显癫痫发作，2例动物出现Ⅰ-Ⅱ级小发作。②海马神经元HE染色显示，对照组大鼠海马神经细胞排列整齐，边缘清晰，形态正常；CL致痫组大鼠可见海马神经元受到损害，尤以CA3区和齿状回最明显，神经元细胞肿胀，排列不整齐、稀疏，胞浆浓缩、深染，胞核固缩；GRb1+CL致痫组大鼠海马神经元CA1到CA4区及齿状回细胞排列紧密、规则，细胞形态正常。③获得重复性较好的大鼠海马组织蛋白质双向电泳图谱。④筛选出6个表达明显变化的蛋白点并获得这些蛋白质的肽质量指纹谱，成功鉴定出6个蛋白质，分别是：脑肌酸激酶（Brain creatine kinase）、吞蛋白A1（Endophilin-A1）、UPF0628蛋白C10orf96同源物（UPF0628 protein C10orf96 homolog）、细胞色素P-450（CytochromeP-450）、磷导素样蛋白（Phosducin-like protein）及桥整合蛋白3（Bridging integrator3）。其中前三个蛋白质在GRb1+CL致痫组表达低于CL致痫组，后三个蛋白质在GRb1+CL致痫组表达低于对照组。 结论：①GRb1可减轻CL所致大鼠癫痫的发作程度和海马神经元的损伤。②CL致痫组、GRb1+CL致痫组和对照组的表达蛋白质组相比存在明显差异。鉴定出的6个差异表达的蛋白质可能与GRb1的神经保护作用有关，其中Brain creatine kinase、Endophilin-A1、UPF0628 protein C10orf96 homolog可能与CL所致癫痫发作有关。