表观遗传学是指在DNA核苷酸序列不发生改变的情况下基因组上发生的可遗传的功能性改变。在表观遗传学研究中,多种调控机制都能够对细胞或个体产生影响,染色质重塑就是其中重要的调控方式,主要通过染色质重塑复合物发挥调控作用。在真核细胞中,染色质重塑复合物可分为四个超家族,分别是:SWI/SNF,ISWI,CHD和INO80超家族。INO80染色质重塑复合物隶属于INO80家族,是一个ATP依赖的多亚基复合物。它包含多个结构域,分别是N端调节结构域,HSA结构域和具有Snf2 ATPase的Insertion结构域,总计15个亚基。INO80能够在ATP驱动的条件下对核小体内的组蛋白进行置换或使核小体在DNA上发生滑动。这些过程能够导致染色质的结构发生变化,影响染色质的可接近性,从而调控基因的表达。另外,INO80能在DNA发生双链断裂(Double strand break,DSB)时被募集到损伤位点,通过置换组蛋白变体H2A.Z来提升同源重组过程中纤丝的形成,促进同源重组,起到促进DNA损伤修复的效果。Flp-In系统是一种稳定转染系统,它能够让目的基因在哺乳动物细胞当中的特定基因组位点进行整合并且稳定表达。该系统将Flp重组位点(Flp Recombination Target,FRT)引入哺乳动物细胞的基因组当中,随后,含有目的基因的表达质粒在Flp整合酶的作用下被整合进入基因组DNA的FRT位点,在新的启动子的启动下,目的蛋白得以稳定地表达。与其他的构建稳定表达细胞的方法相比,Flp-In系统构建稳定表达细胞系具有高效,快速,稳定和能够构建多克隆细胞系的优势。HaloTag标签是由微生物紫红红球菌中的脱卤素酶经过改进得到的,大小为33KD。HaloTag标签可以使烷基残基快速稳定地以共价键的形式结在蛋白上,因此可以连接配体用于多种用途:与不同的颜色配体或者生物素结合,用于活体细胞或固定细胞的成像;通过与生物素形成结合,或是与磁珠等介质亲和吸附,用于蛋白纯化,共定位和蛋白ChIP实验;与报告配体或固化配体结合,对融合蛋白进行荧光检测或固相吸附反应。本实验室前期研究中对hINO80染色质重塑复合物的结构域进行了解析,发现Insertion结构域和HSA结构域中部分亚基的敲低会使复合物丧失ATPase活性或削弱其对核小体的识别与结合。但是结合相关研究文献,有关hINO80亚基的相互作用关系,部分亚基的作用特征以及关于INO80在基因组水平相关的报道还不是很详尽,而且INO80在细胞内表达量低也给实验带来一定的难度。我们利用实验室已有的293FRT细胞系,结合Flp-In系统和HaloTag标签构建能够稳定表达hINO80亚基的过表达细胞系,对过表达的融合蛋白进行纯化并且对hINO80亚基组分进行了检测。另外,我们将HaloTag系统的蛋白纯化与常用的Flag-tag标签系统的纯化效果进行了比较,发现其具有更高的纯化效果。该研究阐述了一种新颖的稳定细胞系构建和蛋白质纯化方法,并且为INO80亚基相互作用,酶活性以及INO80在基因组水平分布等研究提供了基础和方法。