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黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus, RBSDV)为呼肠孤病毒科(Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)的成员,可侵染水稻、玉米、小麦等禾本科植物,引起水稻黑条矮缩病、玉米粗缩病等病毒病,给农业生产造成严重危害。该病毒通过灰飞虱Laodelphax striatellus以持久循回增殖型方式传播。目前对灰飞虱如何传播RBSDV的分子机制尚不清楚。为解析RBSDV与介体灰飞虱的互作关系,本研究前期以RBSDV的外层外壳蛋白P10为诱饵筛选灰飞虱cDNA酵母文库,获得了14种互作的基因片段。本论文进一步分析了其中部分蛋白与RBSDV的互作关系。为进一步确认互作基因与P10的互作关系,采用酵母双杂交系统分析了互作基因片段及基因全长与RBSDV P10的互作。结果表明,肌动蛋白(actin)、激活的蛋白激酶C受体(the receptor for activated protein kinase C, RACK)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glycer aldehyde-3-phosphate dehydrognase, GAPDH3)等互作基因片段存在自激活作用,原肌球蛋白(tropomyosin, Tm)等蛋白没有自激活作用且能与P10蛋白互作。为明确互作基因全长与RBSDV P10的互作关系,克隆了互作蛋白中的actin, RACK, GAPDH3, Tm及灰飞虱寄生病毒HiPV (Himetobi P virus)的外壳蛋白CP3的基因全长,采用酵母双杂交系统分析了它们与RBSDVP10的互作关系,结果表明灰飞虱RACK, HiPV CP3能与P10互作,而actin, GAPDH3和Tm不能与P10互作。此外,为明确灰飞虱actin, RACK，GAPDH3及HiPV CP3这4种蛋白与RBSDV病毒粒子的互作关系,进一步采用病毒覆盖实验(virus gel overlay assay)进行了分析。结果表明,这4种蛋白均能体外结合RBSDV病毒粒子。灰飞虱能传播RBSDV,但不能传播与RBSDV同属的南方水稻黑条矮缩病毒(South rice black-streaked dwarf virus, SRBSDV)。为明确ictin, RACK, GAPDH3及HiPV CP34种蛋白是否是RBSDV与灰飞虱互作的特异性介体因子,采用双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation, BiFC)实验分析了这4种蛋白与SRBSDV的外壳蛋白SP10的互作关系。结果显示,灰飞虱actin, RACK和HiPV CP3能与SP10发生互作,表明它们不是灰飞虱与RBSDV互作的特异性介体因子,可能在介体与病毒互作过程中起着较为保守的作用。RACK能与RBSDV P10互作,此外RACK还报道能与水稻条纹病毒(Rrice stripe virus,RSV)互作,表明其在灰飞虱传毒过程中有重要作用。为进一步探究RACK在灰飞虱传播RBSDV过程中的可能作用,本研究分析了不同龄期灰飞虱体内RACK的表达情况及RBSDV侵染对RACK表达的影响。结果显示,1至5龄灰飞虱中,2龄灰飞虱RACK基因的表达量最高。2,3,4和5龄灰飞虱RACK的表达量分别是1龄的4.2倍,1.5倍,1.5倍和1.0倍。灰飞虱感染RBSDV后,1龄灰飞虱RACK表达量上调了1.7倍,而2,3及4龄灰飞虱RACK表达量分别下调了0.4倍,0.4倍,0.5倍。以上结果表明,在2,3,4龄灰飞虱中,RACK的表达随着龄期的增加而下降,而且RBSDV的侵染能抑制灰飞虱RACK的表达。为进一步分析灰飞虱原肌球蛋白Tm在病毒与介体互作中的作用,本研究克隆了Tm编码基因的全长ORF,并将其连接至原核表达载体pET-32a,在大肠杆菌BL21中进行了原核表达,纯化获得了Tm蛋白,并制备了多克隆抗体,为深入研究灰飞虱Tm蛋白在传播RBSDV过程中的作用奠定了基础。