第一章LIGHT在子痫前期中的致病作用研究研究背景：子痫前期是一种常见的妊娠期疾病,是导致母婴死亡的主要原因,其主要临床表现为高血压和蛋白尿。子痫前期的发病机制尚不明确,使其治疗手段十分局限。目前认为免疫系统紊乱,过度的炎症活跃参与了该病的发生发展。在前期研究中,我们运用ELISA array的方法检测了一系列的炎症因子在子痫前期患者血浆中的表达水平,结果发现新型的肿瘤坏死因子超家族成员14(Tumor Necrosis Factor Super-family member14, TNFSF14/LIGHT)在子痫前期患者母体循环中增高最为明显。LIGHT是近年来研究较热的一种新型炎症因子,参与了多种免疫相关疾病的发生发展,它有两种跨膜型受体-单纯疱疹病毒进入介导子(Herpes Virus Entry Mediator, HVEM/TNFRSF14)和淋巴毒素β受体(Lymphotoxin β Receptor, LTPR/TNFRSF3)。这两种受体分别在不同的病理生理过程中介导LIGHT不同的生物学功能。本实验在前期研究的基础上进一步探讨LIGHT在子痫前期中的生物学效应以及分子机制。目的：观察LIGHT在子痫前期患者循环及胎盘中的表达情况；研究LIGHT对妊娠小鼠和非妊娠小鼠血压和尿蛋白的影响；并进一步探讨LIGHT对妊娠小鼠胎盘和肾脏组织形态学以及LIGHT对非妊娠小鼠肾脏组织形态学的影响。方法：1.收集子痫前期患者以及正常孕妇的血清和分娩后的胎盘组织,用ELISA检测循环中LIGHT表达水平,免疫组化及western blot检测胎盘组织LIGHT及其受体HVEM和LTβR的表达。2.将重组小鼠LIGHT注射到C57/BL6妊娠小鼠以及同等周龄的非妊娠小鼠体内；分别使用HVEM和LTβR的中和性抗体阻断两者与LIGHT的相互作用。每天监测小鼠尾动脉血压；ELISA方法检测尿微量白蛋白水平。干预5天后处死动物,收集胎盘及肾组织行H&E、PAS染色以及电镜检查。结果：1.子痫前期患者血清中LIGHT的表达水平较正常孕妇明显增高；LIGHT及其受体HVEM和LTβR在人类胎盘组织均有表达,并且三者的表达水平在子痫前期患者中均有显著上调。2.妊娠小鼠和非妊娠小鼠在LIGHT干预后均产生高血压；但LIGHT只诱导妊娠小鼠产生蛋白尿,而对非妊娠小鼠的尿微量白蛋白没有显著影响。3.LIGHT可诱导妊娠小鼠胎盘及肾脏组织损伤。4.分别阻断HVEM或LTβR均可显著下调LIGHT诱导的妊娠小鼠中高血压和蛋白尿；减轻胎盘及肾脏病理损伤。5.阻断HVEM或LTβR均可显著下调LIGHT诱导的非妊娠小鼠血压水平。结论：1. LIGHT在子痫前期患者循环及胎盘组织中的表达均明显增高；2.跨膜受体HVEM和LTβR在子痫前期患者胎盘组织中的表达显著增高；3. LIGHT通过HVEM和LTβR信号通路,诱导妊娠小鼠产生子痫前期临床表现-高血压和蛋白尿；4. LIGHT诱导的小鼠蛋白尿及肾脏损伤具有妊娠特异性。第二章LIGHT诱导子痫前期的分子机制研究研究背景：子痫前期是一种威胁母婴生命安全的妊娠期疾病,发病率在初产妇中高达8%。尽管子痫前期的发病机制尚不十分明确,但目前许多研究均证实子痫前期是一种自身免疫性疾病,众多炎症因子在该病的发生发展中发挥了重要作用。LIGHT是一种新型的肿瘤坏死因子超家族成员,已被证明在许多免疫相关性疾病中扮演重要的角色。我们在上一章节的研究中已经证实：1. LIGHT在子痫前期患者循环和胎盘组织中表达显著增高；2. LIGHT通过与跨膜受体HVEM和LTβR相互作用可诱导妊娠小鼠产生高血压、蛋白尿、胎盘及肾脏组织损伤等子痫前期的临床表现和病理生理改变；3. LIGHT通过与跨膜受体HVEM和LTβR相互作用可诱导非妊娠小鼠产生高血压,但是对非妊娠小鼠的尿微量白蛋白和肾脏组织没有影响。在此基础上,本实验进一步探讨LIGHT诱导妊娠小鼠产生子痫前期的下游分子机制。目的：观察LIGHT对妊娠小鼠及非妊娠小鼠抗血管生成因子可溶性fms-样酪氨酸激酶1(soluble fms-like tyrosind kinase-1, sFlt-1)和缩血管因子内皮素-1(Endothelin-1, ET-1)的影响；观察LIGHT对妊娠小鼠胎盘组织中细胞凋亡的影响。方法：将重组小鼠LIGHT注射到C57/BL6妊娠13天小鼠以及同等周龄的非妊娠雌鼠体内；分别使用HVEM和LTβR的中和性抗体阻断两者与LIGHT的相互作用。干预5天后处死动物并收集血清和胎盘组织,ELISA方法检测血清sFlt-1和ET-1表达水平；TUNEL染色检测LIGHT对妊娠小鼠胎盘组织细胞凋亡的影响。结果：1. LIGHT可以诱导妊娠小鼠循环中sFlt-1水平显著上调,但对非妊娠小鼠循环中sFlt-1表达水平没有影响；2. LIGHT可显著上调妊娠小鼠及非妊娠小鼠循环中ET-1的表达水平；3.阻断HVEM或LTβR均可抑制妊娠小鼠sFlt-1的生成,但对非妊娠小鼠循环中sFlt-1表达水平没有影响；4.阻断HVEM或LTβR均可下调妊娠小鼠及非妊娠小鼠循环中增高ET-1水平；5. LIGHT可以诱导妊娠小鼠胎盘组织滋养层细胞凋亡增加；6.阻断HVEM或LTβR均可明显抑制LIGHT诱导的妊娠小鼠胎盘组织滋养层细胞凋亡。结论：1.sFlt-1是介导LIGHT诱导的妊娠小鼠高血压和蛋白尿的重要下游因子；2.ET-1是介导LIGHT诱导的妊娠小鼠高血压以及非妊娠小鼠高血压的共同下游因子；3. LIGHT通过LTβR和HVEM信号介导,可刺激妊娠小鼠胎盘组织滋养层细胞凋亡增加。第三章DcR3在子痫前期中的作用和机制研究研究背景：子痫前期是一种与免疫异常相关的妊娠期疾病,众多炎症因子被证实参与了该病的发生发展。肿瘤坏死因子超家族成员LIGHT是一种新型的炎症因子,在一系列免疫相关疾病中发挥重要的致病作用。诱饵受体3(Decoy Receptor3, DcR3/TNFRSF6B)是LIGHT的可溶性受体,可以竞争性地与LIGHT结合,从而阻断LIGHT与跨膜受体HVEM和LTβR的相互作用。因此,DcR3是一种重要的免疫抑制因子。我们在前期研究中证实LIGHT可通过与HVEM和LTβR相互作用诱导妊娠小鼠产生子痫前期,但是DcR3在子痫前期中的生物学功能尚不明确。本实验在前期工作的基础上进一步探讨LIGHT和DcR3在子痫前期中的作用。目的：观察LIGHT对体外培养的胎盘组织的形态学以及sFlt-1分泌水平的影响；观察DcR3对LIGHT干预后的胎盘组织形态学以及sFlt-1分泌水平的影响。方法：获取正常孕妇足月生产后的胎盘组织进行体外培养,用重组人LIGHT干预24小时后留取上清和胎盘组织。运用ELISA方法检测上清sFlt-1水平；TUNEL染色检测胎盘组织细胞凋亡；western blot检测凋亡相关因子Bax和Bcl-2的表达水平。结果：1. LIGHT可以诱导体外培养的人胎盘组织sFlt-1分泌增多；2. LIGHT可诱导体外培养的人胎盘组织凋亡细胞增加、促凋亡因子Bax表达增加以及抑制凋亡因子Bcl-2表达下调；3.DcR3可以抑制LIGHT诱导的sFlt-1分泌、改善LIGHT诱导的胎盘组织凋亡。结论：1. LIGHT可诱导体外培养的人胎盘组织凋亡增加以及sFlt-1分泌增多；2.DcR3可以抑制LIGHT诱导的人胎盘组织凋亡以及sFlt-1的生成。