PRRSV的E基因和猪IL-10、IL-17基因的克隆及其重组真核载体的构建与表达

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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍与仔猪呼吸道为主要特征的传染病;PRRSV的E基因能产生中和抗体;IL-10是一种多功能的宿主细胞因子,有增强免疫的作用;而IL-17是一种新发现的多效细胞因子。 本研究为寻找一种高效基因工程疫苗表达PRRSV的E蛋白抗原,通过设计4对针对PRRSV的E和RE基因、猪的IL-10和IL-17基因,在每对引物的上下游都加上适当的酶切位点,在E和RE引物的下游分别加上血凝素(HA)报告基因,在IL-10和IL-17引物的下游分别加上组蛋白(His)报告基因,通过扩增出含完整开放阅读框架(ORF)的四个目的基因片段,构建出三个真核表达载体:P-E、P-RE-IL-10、P-RE-IL-17。 对构建成功的3个真核表达载体用脂质体转染法进行了体外细胞表达,通过G418筛选获得了能够稳定表达3个质粒的细胞株,在连续传几次代后,用间接免疫荧光检测出了表达的E蛋白,E和IL-10、IL-17分别融合蛋白。
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