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目的:探讨NOS/NO、HO/CO、RhoA/Rho激酶等信号通路在自发性高血压大鼠(SHR)阴茎海绵体中的表达及相互关系。方法:1.实验动物:健康成年雄性SPF级自发性高血压大鼠(spontaneoushypertensive rat，SHR)与对照组WKY各7只，16周龄，体重250～300g。置于温度25～32℃，湿度60％～85％，自由饮水及进食，12h昼夜交替环境中喂养。2.勃起功能测定:以戊巴比妥钠对实验大鼠进行麻醉(30mg/Kg，腹腔内注射)，暴露左侧颈总动脉，用充满肝素盐水的30G针头成功穿刺，连接压力转换器，计算机连续监测记录平均动脉压(MAP)。取下腹部正中切口，仔细在前列腺两侧后方找寻到海绵体神经，生理盐水棉片暂时覆盖备用。暴露阴茎海绵体，用24G针头成功穿刺进入右侧海绵窦，连接压力转换器，测定大鼠海绵体内压(ICP)。利用电刺激海绵体神经，(刺激参数设置为:电压分别为3V、5V，频率12Hz，波幅5ms，持续30s～60s)，记录ICP/MAP比值变化。3.取材及制备:阴茎勃起功能测定结束后，立即在靠近阴茎海绵体根部处取下阴茎海绵体，清除尿道海绵体及阴茎背静脉等组织，PBS液(0.01mol/L，pH=7.40±0.05)冲洗尽血凝块，将组织块分为两段，一段用液氮冷冻备用，另一段用中性甲醛固定。4.Western印迹方法分析ROCK2、 HO-2:将液氮冻存标本在研磨器内磨碎，迅速加入RIPA+PMSF裂解液，置于冰上反应30min，离心(12000×g，4℃，10min)，吸取上清液。BCA法测定蛋白总浓度后，分别在7.5％和10％SDS-PAGE凝胶每孔中加入相同蛋白量蛋白样品。上样前，将样品溶于5×上样缓冲液中，100℃煮沸5min，5000×g离心处理。电泳后蛋白被转印到PVDF膜上(0.22um，Millipore)。将转印蛋白后的PVDF膜予封闭液常温下封闭2h，加入一抗(羊抗ROCK2抗体及兔抗HO-2抗体，1:300稀释)4℃过夜，TTBS沈膜3次，每次10min；再加入二抗(兔抗羊二抗及羊抗兔二抗，1:2000稀释)常温下孵育2h。ECL发光试剂显色，凝胶成像仪采集并分析图像及定量蛋白。5。免疫组化分析HO-2及eNOS:SP二步法，阴茎海绵体标本经石蜡包埋后，按免疫组化常规处理石蜡切片，PBS洗10min；0.3％H2O2-甲醇处理30min；高压修复5min；10％正常羊血清室温封闭15min；滴加一抗(兔抗HO-2抗体及兔抗eNOS抗体，1:50)于标本上，4℃过夜；PBS沈3次，每次10min；滴加二抗(羊抗兔二抗，1:100)，室温孵育30min；DAB显色。6.数据处理:所有结果均用x±s表示，统计方法采用配对t检验，统计分析用SPSS13.0软处理，以P<0.05表示统计有显著差异。结果:SHR组在利用电刺激海绵体神经后ICP/MAP比值升高不明显(p<0.05)，海绵体组织中ROCK2蛋白表达水平升高显著(。P=0.017)，HO-2表达水平则降低显著(P=0.006)。HO-2主要位于阴茎海绵体的平滑肌细胞及神经细胞内,eNOS则主要位于阴茎海绵体血管内皮细胞。二者在SHR组表达明显降低。结论:1.RhoA/Rho激酶信号通路与高血压ED的发生有关，但ROCK2是引起高血压ED的独立因素还是继发于NO通路损害目前尚不清楚。
2.HO-2的蛋白表达水平在SHR组较WKY组显著降低,可能使得CO含量下降，并通过cGMP途径引起高血压ED。3.NOS/NO、HO/CO、RhoA/Rho激酶均与SHR ED有关，并且可能互相影响。