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目的:应用高效液相色谱法,同时测定关黄柏中黄柏碱、木兰碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、黄柏内酯、黄柏酮七种成分的含量,在此基础上研究关黄柏提取物最佳制备工艺;并对关黄柏提取物中总生物碱类成分进行含量测定,建立其质量控制方法。方法:采用HIPLC建立关黄柏中五种生物碱类成分黄柏碱、木兰碱、药根碱、巴马汀、小檗碱和两种柠檬苦素类成分黄柏内酯、黄柏酮同时进行含量测定的方法,并以此为前提,应用加热回流提取法,采用正交设计考察乙醇浓度、提取时间、溶媒体积和提取次数四个因素对制备关黄柏最佳提取物的影响并确定最佳提取工艺。以盐酸小檗碱为对照品,采用酸性染料比色法建立关黄柏提取物中总生物碱类成分含量测定方法。结果:(1)采用高效液相色谱法,建立关黄柏中七种成分同时含量测定方,法,以 Diamonsil C1 8 为色谱柱(4.6mm × 200 mm,5 μm),Nova-PakC18 Guard-PakTM为保护柱,乙腈(A)-0.1%磷酸水(每升含0.02mol磷酸二氢钠)(B)为流动相梯度洗脱;流速:1.0mL·min-l,柱温:30℃,进样量:1 0 μ L,检测波长:黄柏碱和黄柏内酯:2 0 7 n m,黄柏酮:2 1 3 n m,木兰碱:2 2 3 n m,药根碱、巴马汀和小檗碱:3 4 8 n m。黄柏碱、木兰碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、黄柏内酯和黄柏酮线性范围分别为 3.55～35.5,9.78～97.8,0.579 8～5.798,7.25～72.5,25.2～252,14.66～146.6,5.738～57.38μg.mL-1,相关系数均大于0.999。经方法学考察,黄柏碱、木兰碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、黄柏内酯和黄柏酮精密度RSD值分别为1.6 8%、0.72%、1.38%、0.73%、0.5 1%、1.13%、0.93%;重复性 RSD 值分别为 0.32%、1.52%、0.8 1%、1.0 9%、1.54%、2.5 3%、2.03%;稳定性性 RSD 值分别为 1.88%、0.68%、1.34%、0.64%、0.87%、1.1 7%、0.96%;平均回收率分别为 9 8.3 1%、100.61%、99.68%、97.22%、1 01.06%、98.3 6%、100.71%,对应的相对标准偏差分别为 1.54%、2.1 1%、2.51%、1.52%、2.26%、1.9 9%、2.68%。说明精密度、稳定性、重复性和回收率均符合要求,可用于关黄柏中这7个成分含量的同时测定。(2)6倍量70%乙醇提取3次,每次60min为关黄柏最佳的提取工艺,并且提取物叶中各指标成分的转移率均达到90%。(3)酸性染料比色法测定关黄柏提取物中总生物碱类成分的最佳条件为 pH 4.0的枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液7.5ml,溴酚蓝溶液 1.5ml,三氯甲烷 10ml萃取 1 次,检测波长为414.5nm。盐酸小檗碱在0.02～0.1mg/ml内具有良好的线性关系,相关系数大于0.999。回归方程为y=6.6x-0.0 1 68。关黄柏提取物的供试品溶液的重复性 RSD为 1.1 5%,平均回收率为99.80%,并且在 3h内此方法非常稳定。结论:本研究利用高效液相色谱法建立了关黄柏中多成分同时含量测定方法,在此基础上确定了关黄柏提取物最佳制备工艺,与此同时,建立了关黄柏提取物中总生物碱类成分含量测定方法。这些研究为关黄柏质最控制的进一步完善以及工业化生产提供了基础。