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沙丁胺醇（Salbutamol,Sal）,又名舒喘宁,为选择性β2受体激动剂。对动物具有促进骨骼肌（瘦肉）生长,减少脂肪蓄积等作用。常在猪、牛、鸡等畜禽的生产中非法用作促生长剂,可提高饲料转化率、增加瘦肉产量。但是,食品中沙丁胺醇的残留能引起心悸、头疼、目眩、呼吸困难,严重影响人们的健康。另外,检测沙丁胺醇残留的技术手段也相对滞后。因此,一些不法分子为谋取经济利益,在养殖场非法使用沙丁胺醇代替“瘦肉精”克伦特罗作为促生长剂。目前,检测沙丁胺醇的方法有气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）以及酶联免疫吸附法（ELISA）等。GC-MS、HPLC和LC-MS方法准确可靠,但样品前处理繁琐,对仪器设备以及操作过程的要求较高,不适于生产、基层单位及现场检测。ELISA检测是一种基于抗原抗体反应和酶化学反应的检测方法,具有快速、灵敏、操作简单和一次检测样品量大的特点,而且不需要复杂昂贵的的仪器设备,对操作者的专业要求也比较低。本实验通过Sal与琥珀酸酐的醇解反应制备Sal的琥珀酸衍生物,用碳二亚胺法将Sal琥珀酸衍生物偶联到载体蛋白牛血清白蛋白和卵清白蛋白上,合成为完全抗原Sal-HS-BSA和Sal-HS-OVA。通过紫外扫描（UV）和SDS-PAGE进行鉴定,确认沙丁胺醇已经连接到载体蛋白上,偶联比分别为7.7:1和8.8:1。用Sal-HS-BSA作为免疫原免疫BALB/C小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,抗体效价均达到了1: 103-104。选择免疫效果最好（抗体效价为1:2.56×104,IC50最低为270 ng/ml）的小鼠,取其脾细胞与SP2/0进行细胞融合,平均每孔有1-2株融合细胞生长,融合率为100℅。经阳性细胞亚克隆后,获得6株杂交瘤细胞细胞株,分别测定其IC50,筛选出2株高效价、敏感、特异的杂交瘤细胞株,分别命名为2D9和1C4。将筛选得到的2D9和1C4杂交瘤细胞分别注射到成年Balb/c小鼠腹腔,收集腹水,经辛酸-硫酸铵法纯化后,蛋白含量为3.6mg/ml,纯度达78℅-86℅。经间接ELISA效价检测,2D9杂交瘤细胞株的细胞培养上清液和腹水抗体效价分别为1:2.56×104和1:4.096×106;1C4杂交瘤细胞株的细胞培养上清液和腹水抗体效价分别为1:1.28×104和1:2.048×105。经抗体亚型鉴定,2D9和1C4细胞株所分泌的抗体均为IgG1。采用阻断ELISA法测定抗Sal单克隆抗体的敏感性和特异性。两株抗体IC50值约为6.25 ng/ml,表明抗Sal单克隆抗体对Sal具有较高的敏感性。检测抗Sal单克隆抗体与载体蛋白（BSA、OVA）、沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、异丙肾上腺素和去甲肾上腺素的交叉反应性,根据交叉反应率（Cross reaction,CR）判定抗Sal单克隆抗体对盐酸克伦特罗有26.09%的交叉反应性,对载体蛋白（BSA、OVA）,莱克多巴胺等其它肾上腺激素类无交叉反应,说明所制备的抗Sal单克隆抗体具有很高的特异性。本研究获得了高效价、敏感、特异性的抗Sal抗体,并以抗单克隆抗体2D9为基础,初步确立了Sal残留免疫学检测方法,同时对相关条件如Sal-OVA包被条件、酶标抗体最佳使用浓度、酶标抗体最佳反应时间进行了优化,应用间接竞争ELISA方法建立了检测Sal残留的标准曲线,曲线回归方程为y=-32.595x+48.1 （R2=0.9841）,灵敏度和最低检出限为别为1.14 ng/ml和0.15 ng/ml,为进一步沙丁胺醇残留免疫检测产品的研发奠定了基础。