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本研究以人类新型冠状病毒NL63 (human coronavirus NL63, HCoV-NL63)木瓜样蛋白酶(papain-like protease, PLP)为研究对象,首先构建了木瓜样蛋白酶1 (papain-like protease 1, PLP1)的突变体D1225A和木瓜样蛋白酶2 (papain-like protease 2, PLP2)的突变体D1849A表达载体。通过Western Blotting技术证实,PLP1及其突变体C1062A、H1212A、D1225A对泛素(ubiquitin, Ub)分子不具有去泛素化(deubiquitinase, DUB)活性,PLP2却明显不同,野生型PLP2及突变体D1849A具有较强的DUB活性,而突变体C1678A、H1836A则丧失了此活性,同时对泛素样分子——干扰素刺激基因15(interferon stimulate gene 15, ISG15)进行检测,得到了相同的结论,提示PLP2的第1678位半胱氨酸和第1836位组氨酸是其DUB活性所必需的位点,第1849位天冬氨酸属于非必需位点。HCoV-NL63 PLP对宿主抗病毒天然免疫反应调控机制研究证实,PLP1及突变体C1062A、H1212A、D1225A均不能抑制干扰素-β(interferon-β, IFN-β)表达;PLP2和突变体D1849A却能强烈抑制IFN-β表达,但突变体C1678A、H1836却丧失了此功能。这表明,PLP2的干扰素拮抗活性与PLP2的DUB活性具有一定相关性。同时,对整个通路中关键蛋白调控的研究发现,PLP2与维甲酸诱导基因I (retinoic acid inducible gene I, RIG-I)、ERIS(endoplasmic reticulum IFN stimulator)相互作用,并利用自身的DUB活性特异性切除RIG-I、ERIS分子的多聚泛素化修饰,阻断其天然免疫反应,逃逸宿主防御系统。