本研究通过特异性引物P1扩增乳杆菌16S rDNA部分序列,结合DGGE技术对断奶幼犬的治疗组与攻毒组进行乳杆菌多样性分析。期望建立一种快速、简单分析乳杆菌多样性的方法并了解健康和腹泻仔犬的乳杆菌变化,为仔犬肠道环境指标和体系的建立、针对断奶仔犬乳杆菌微生态产品开发提供一定的理论依据。本文的主要内容与结果如下：1.引物P1通过利用Blast Programs对105种或亚种乳杆菌进行比对,发现P1在乳杆菌16S rDNA上677-693区域有高度靶向性；同时又对肠道优势菌群Closditum,Eubact--erium,Bacteroides,Bifidobacterium等进行比对,发现引物P1在这些细菌的16S rDNA存在碱基不匹对。该结果随后通过PCR结合测序结果证明了P1只能扩增乳杆菌。通过对巢式PCR及DGGE条件的优化,建立了利用DGGE技术分析肠道乳杆菌多样性的方法。2.选取健康幼龄犬16只,分四组,分别为对照组A(芽孢杆菌对照组)、对照组B(空白对照组)、治疗组(沙门杆菌攻毒,芽孢杆菌治疗组)、攻毒组(沙门杆菌攻毒组),每组4个重复,试验期为9 d。攻毒试验结果显示：未饲喂芽孢杆菌的攻毒组,4只犬都出现了腹泻,饲喂了芽孢杆菌的治疗组只有一只出现了腹泻现象,对照组无腹泻现象,说明治疗犬与攻毒犬模型建立成功。3.应用PCR-DGGE分析肠道菌群结果表明：①试验0d各组间DGGE图谱条带相似性都在57%以上,图谱条带组内和各组间都没有显著性差异(P>0.05),既有相同条带,也不同条带,说明健康仔犬的肠道内乳杆菌大致相同。②对照组A在饲喂的9d过程中,肠道乳杆菌多样性逐步提高,各重复个体共同出现的优势条带增多,说明芽孢杆菌能增大肠道中乳杆菌多样性。从聚类图看出,0d组间相似性66%～88%,3 d组间相似性71%～90%,6d组间相似性77%～89%,9 d组间相似性62%～74%。说明芽孢杆菌具有稳定肠道乳杆菌的功能。③攻毒组9d乳杆菌多样性下降。说明沙门杆菌能减少肠道内乳杆菌多样性。从组内平均条带数来看,攻毒后条带平均数为5.3,与试验0d相比下降了27.4%,与试验3d和6d相比分别下降了39%,35%。④治疗组在9d乳杆菌多样性出现了下降,平均条带数为7.3,与试验0d相比,平均条带数下降了8%,与试验3d相比下降35.3%,与试验6d相比下降18.9%。由于芽孢杆菌的保护作用,平均条带数多于攻毒组,多样性下降比例明显低于攻毒组。说明芽孢杆菌能增多腹泻犬乳杆菌多样性。综上断奶仔犬肠道乳杆菌多样性与机体的健康呈正相关,当机体健康时乳杆菌多样性增大,而在腹泻时乳杆菌多样性降低。芽孢杆菌作为微生态制剂,能有效改善肠道乳杆菌的的数量,并稳定其结构。