我们根据Triques，K所报道的HIV-1全基因序列中的gag基因序列设计合成了一对引物(含Bam HI和Hind Ⅲ两个酶切位点)，利用PCR技术扩增了HIVp24抗原全基因序列(约690个bp)， 将其插入表达载体pRSET，获得了pRSET-p24克隆。为了获得大量的高纯度p24蛋白，我们将此重组表达质粒转化大肠杆菌(BL21)诱导表达出p24蛋白。利用固定化金属离子(Ni2’)配体亲和层析技术(IMAC)从表达蛋白中纯化了目的蛋白。通过 SDS-PAGE电泳观察可见一条24KD的外源基因表达带，与预计片段大小一致，且纯化后的蛋白未见非特异带。Western-blot实验结果表明重组蛋白具有p24抗原活性。纯化后的p24抗原与生物制品检定所提供的p24抗原(p检)比较表明，我们制备的p24抗原具有与其相近的特异性及活性。 将纯化的p24抗原免疫Balb／c小鼠的脾脏，免疫 摘要后的脾细胞与SPZ川进行融合。经＊AT、HT选择培养后，通过有限稀释法我们筛选出三株A值较高的产生p24抗体的单克隆细胞，命名为24－l、24－2、24－3。用这三株细胞分别免疫Ba比儿 小鼠腹腔使其产生腹水，制备出单克隆抗体。经硫酸氨盐析技术口‘’、亲和层析技术口‘’对腹水进行了单抗蛋白的粗提及纯化。利用纯化的单克隆抗体初步建立了检测p24抗原的双抗体夹。GELISA法（以下简称夹心法L 结果证明这三株单抗均具有良好的抗原结合活性。与乙肝表面抗原、丙肝RNA阳性血清无交叉反应，证明其特异性亦较高。初步应用结果表明，我们所建立的夹。C法与美国杜邦（Do Pout）公司生产的 检测 p24抗原的 间接ELISA（以下简称杜邦间接法）试剂盒比较，夹心法灵敏度为80gg，牙｛ 于杜邦 间接法（20gg）；两者特异性均为 1000。而用自制单抗建立的间接法，其检测灵敏度则可高于80pg，但低于杜邦间接法。本研究成果为下一步研制检测 HIV p24抗原的 ELISA试剂奠定了一定的基础。